| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1 细菌脂肪酸生物合成途径简介 | 第13-14页 |
| 2 细菌脂肪酸合成酶系简介 | 第14-17页 |
| 2.1 丙二酰单酰辅酶A:ACP转酰基酶 | 第14-15页 |
| 2.2 β-酮脂酰ACP合成酶 | 第15页 |
| 2.3 β-酮酰ACP还原酶 | 第15页 |
| 2.4 β-羟脂酰ACP脱水酶 | 第15页 |
| 2.5 烯脂酰ACP还原酶 | 第15-17页 |
| 3 FabH蛋白基本功能及其结构 | 第17-18页 |
| 4 与FabH相关的抗菌靶标药物的研究 | 第18-31页 |
| 4.1 乳霉素 | 第18-19页 |
| 4.2 浅蓝菌素 | 第19-20页 |
| 4.3 平板霉素和平板素 | 第20-21页 |
| 4.4 吲哚类化合物 | 第21-22页 |
| 4.5 苯甲酰氨基苯甲酸类化合物 | 第22页 |
| 4.6 烷磺酰基类化合物 | 第22-23页 |
| 4.7 肉桂酸类化合物 | 第23页 |
| 4.8 席夫碱及其衍生物 | 第23-26页 |
| 4.9 含有硫原子的化合物 | 第26-28页 |
| 4.10 香草酰腙类化合物 | 第28页 |
| 4.11 硝唑类化合物 | 第28-29页 |
| 4.12 吡咯-2-羧酸类化合物 | 第29-30页 |
| 4.13 吡唑琳类杂环化合物 | 第30-31页 |
| 第二章 大肠杆菌和水稻黄单胞菌fabH,fabD基因的克隆及表达 | 第31-49页 |
| 1 实验材料 | 第32-36页 |
| 1.1 供试菌株、质粒及引物 | 第32-33页 |
| 1.2 酶及试剂 | 第33页 |
| 1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 1.4 培养基 | 第33-34页 |
| 1.5 常用试剂及缓冲液的配制 | 第34-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-44页 |
| 2.1 细菌基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第37-38页 |
| 2.3 PCR反应 | 第38页 |
| 2.4 DNA凝胶电泳 | 第38-39页 |
| 2.5 PCR产物回收、DNA酶切和连接 | 第39-40页 |
| 2.6 质粒的转化 | 第40-41页 |
| 2.7 转化子的验证 | 第41页 |
| 2.8 序列分析 | 第41-42页 |
| 2.9 重组菌株的诱导表达 | 第42页 |
| 2.10 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 2.11 蛋白原核表达 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.1 fabH_(EC),fabD_(EC),fabH_(Xoo),fabD_(Xoo)片段的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 3.2 重组质粒pET-28a-fabH_(Ec),pET-28a-fabD_(Ec),pET-28a-fabH_(Xoo),pET-28a-fabD_(Xoo) 的验证 | 第45-46页 |
| 3.3 FabH_(Ec), FabD_(Ec), FabH_(Xoo), FabD_(Xoo)纯化后的SDS-PAGE鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4 FabH_(Ec)与FabH_(Xoo)的序列分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第三章 化合物对大肠杆菌及水稻黄单胞菌FabH抑制活性测试 | 第49-59页 |
| 1 实验材料 | 第50-51页 |
| 1.1 供试菌株 | 第50页 |
| 1.2 试剂 | 第50-51页 |
| 1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 1.4 培养基 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.1 化合物抗Xoo活性测试——MIC值判定 | 第51页 |
| 2.2 化合物对E.coli FabH和Xoo FabH抑制活性测试 | 第51-52页 |
| 2.3 分子对接 | 第52页 |
| 2.4 化合物HR45对水稻白叶枯病菌的活体防效 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-56页 |
| 3.1 化合物抗Xoo及抑制FabH活性的初筛 | 第53-54页 |
| 3.2 化合物HR45对E.coli FabH及Xoo FabH的抑制活性 | 第54页 |
| 3.3 分子对接结果 | 第54-56页 |
| 3.4 化合物HR45对水稻白叶枯病菌的防效 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 水稻黄单胞-fabH基因的敲除 | 第59-69页 |
| 1 实验材料 | 第59-61页 |
| 1.1 供试菌株、质粒及引物 | 第59-60页 |
| 1.2 酶及试剂 | 第60页 |
| 1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 1.4 培养基 | 第60-61页 |
| 1.5 常用试剂及缓冲液的配制 | 第61页 |
| 2 实验方法 | 第61-63页 |
| 2.1 Xoo KACC10331基因组DNA和pK18mobSacB质粒的提取 | 第61页 |
| 2.2 fabH基因上游、下游片段的PCR扩增及纯化 | 第61-62页 |
| 2.3 fabH基因上游、下游片段的连接转化 | 第62页 |
| 2.4 XooKACC10331电转感受态细胞的制备及突变体的筛选 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-67页 |
| 3.1 △fabH突变株的构建 | 第63-67页 |
| 3.2 △fabH突变株与野生型生长差异 | 第67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 主要研究结果 | 第69页 |
| 本文创新点 | 第69页 |
| 尚待解决的问题 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
