| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第12-19页 |
| 1 eEF2K概述 | 第12-16页 |
| 1.1 eEF2K的分子结构 | 第13页 |
| 1.2 eEF2K的调控 | 第13-15页 |
| 1.2.1 自身磷酸化对eEF2K活性的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.2 其他位点磷酸化对eEF2K活性的调控 | 第14-15页 |
| 1.3 eEF2K一个潜在的抗肿瘤靶点 | 第15-16页 |
| 1.3.1 抑制eEF2K增强药物的抗肿瘤活性 | 第15页 |
| 1.3.2 eEF2K的抑制剂的研究进展 | 第15-16页 |
| 2 细胞自噬 | 第16-17页 |
| 3 吉非替尼与耐药 | 第17-19页 |
| 第一部分 非小细胞肺癌中吉非替尼诱导eEF2K活化与自噬 | 第19-35页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1 实验材料 | 第19-23页 |
| 1.1 实验药品 | 第19页 |
| 1.2 实验试剂 | 第19-20页 |
| 1.3 耗材 | 第20页 |
| 1.4 抗体 | 第20页 |
| 1.5 仪器 | 第20-21页 |
| 1.6 常用溶液配制方法 | 第21-23页 |
| 1.7 细胞株和细胞 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.1 测定吉非替尼处理后NSCLC中eEF2K活性 | 第23-25页 |
| 2.1.1 测定吉非替尼处理后H1975和A549这两种NSCLC的细胞活力 | 第23-24页 |
| 2.1.2 测定吉非替尼处理后H1975细胞中eEF2K活性 | 第24-25页 |
| 2.1.3 测定吉非替尼处理后A549细胞中eEF2K活性 | 第25页 |
| 2.2 测定吉非替尼处理后两种细胞中自噬活性 | 第25-28页 |
| 2.2.1 测定吉非替尼处理后H1975细胞中自噬活性 | 第25-26页 |
| 2.2.2 测定吉非替尼处理后A549细胞中自噬活性 | 第26-28页 |
| 3 实验结果 | 第28-32页 |
| 3.1 吉非替尼处理对非小细胞肺癌细胞eEF2K活性的影响 | 第28-30页 |
| 3.1.1 吉非替尼对H1975和A549两种非小细胞肺癌细胞株的增殖抑制作用 | 第28页 |
| 3.1.2 吉非替尼处理对H1975细胞中eEF2K活性的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.3 吉非替尼处理对A549细胞中eEF2K活性的影响 | 第29-30页 |
| 3.2 吉非替尼处理对非小细胞肺癌细胞中自噬活性的影响 | 第30-32页 |
| 3.2.1 吉非替尼处理对H1975细胞中自噬活性的影响 | 第30页 |
| 3.2.2 吉非替尼处理对A549细胞中自噬活性的影响 | 第30-32页 |
| 讨论 | 第32-35页 |
| 第二部分 吉非替尼作用中eEF2K、自噬、细胞死亡三者关系研究 | 第35-62页 |
| 引言 | 第35-36页 |
| 1. 实验材料 | 第36-40页 |
| 1.1 实验药品 | 第36页 |
| 1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 1.3 耗材 | 第36-37页 |
| 1.4 抗体 | 第37页 |
| 1.5 仪器 | 第37页 |
| 1.6 常用溶液配制方法 | 第37-40页 |
| 1.7 细胞株和细胞 | 第40页 |
| 2. 实验方法 | 第40-49页 |
| 2.1 抑制eEF2K活性或干扰其表达后吉非替尼引起的自噬活性的测定 | 第40-44页 |
| 2.1.1 确定A484954最适作用时间以及最适作用浓度 | 第40-42页 |
| 2.1.2 检测A484954与吉非替尼联合作用后两种NSCLC细胞系中自噬活性 | 第42-43页 |
| 2.1.3 将eEF2K干扰后检测由吉非替尼引起的NSCLC细胞自噬活性 | 第43-44页 |
| 2.2 检测A484954与Stattic联合作用后两种NSCLC细胞系中自噬活性 | 第44页 |
| 2.2.1 检测Stattic处理后H1975细胞中eEF2K活性以及自噬活性 | 第44页 |
| 2.2.2 检测A484954和Stattic联合作用后两种NSCLC细胞系中自噬活性 | 第44页 |
| 2.3 检测吉非替尼和A484954联合作用后NSCLC细胞系增殖能力 | 第44-47页 |
| 2.3.1 检测两者同时作用后NSCLC细胞系增殖能力 | 第44-45页 |
| 2.3.2 检测两者序贯给药后NSCLC细胞系增殖能力 | 第45页 |
| 2.3.3 敲除eEF2K后给药检测NSCLC细胞系增殖能力 | 第45-47页 |
| 2.4 抑制吉非替尼引起的自噬活性对NSCLC细胞系中凋亡水平的检测 | 第47页 |
| 2.5 敲除eEF2K后检测NSCLC细胞系生存能力 | 第47-48页 |
| 2.6 初步探讨eEF2K敲除后促进NSCLC细胞系生存能力的机制 | 第48-49页 |
| 2.7 用乳腺癌细胞系MCF-7以及MDB-MB-231细胞对eEF2K敲除后对细胞自噬能力的影响进行验证 | 第49页 |
| 3. 实验结果 | 第49-59页 |
| 3.1 抑制eEF2K活性或干扰其表达对由吉非替尼引起自噬活性的影响 | 第49-53页 |
| 3.1.1 确定A484954最适作用时间以及最适作用浓度 | 第49-51页 |
| 3.1.2 A484954与吉非替尼联合作用对两种NSCLC细胞中eEF2K活性与自噬活性关系的影响 | 第51-52页 |
| 3.1.3 通过SiRNA敲除eEF2K对由吉非替尼引起NSCLC细胞自噬活性的影响 | 第52-53页 |
| 3.2 A484954与Stattic联合作用对两种NSCLC细胞系中eEF2K活性与自噬活性关系的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.1 Stattic作用于H1975细胞对eEF2K及自噬活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.2 A484954和Stattic联合作用对两种NSCLC细胞系中eEF2K活性与自噬的关系影响 | 第54页 |
| 3.3 抑制吉非替尼引起的eEF2K活性对NSCLC细胞系生存能力的影响 | 第54-57页 |
| 3.3.1 吉非替尼和A484954同时作用对NSCLC细胞系生存能力的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.2 两者序贯给药对NSCLC细胞系生存能力的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.3 干扰eEF2K后给药对NSCLC细胞系生存能力的影响 | 第56页 |
| 3.3.4 吉非替尼引起的自噬活性保护NSCLC细胞系的作用 | 第56-57页 |
| 3.4 eEF2K干扰对NSCLC细胞系生长与自噬的影响 | 第57-59页 |
| 3.4.1 eEF2K干扰对NSCLC细胞系生长的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.2 干扰eEF2K后诱导NSCLC细胞自噬 | 第58页 |
| 3.4.3 干扰eEF2K后对乳腺癌细胞自噬能力的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.4 eEF2K干扰对乳腺癌细胞生长的影响 | 第59页 |
| 讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67页 |
| 发表学术论文 | 第67页 |
