中文摘要 | 第8-12页 |
英文摘要 | 第12-16页 |
前言 | 第17-19页 |
材料和方法 | 第19-28页 |
1.实验材料 | 第19-20页 |
1.1细胞株 | 第19页 |
1.2 主要仪器 | 第19页 |
1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
1.4 主要试剂配制 | 第20页 |
2.实验方法 | 第20-28页 |
2.1 细胞复苏、培养、传代、冻存 | 第20-21页 |
2.2 MTT法检测MCF-7 和MCF-7/ADR细胞的药物敏感性 | 第21页 |
2.3 Western-blot方法检测MCF-7 和MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5蛋白水平的表达 | 第21-23页 |
2.4 MCF-7 和MCF-7/ADR细胞RNA提取和qRT-PCR | 第23-25页 |
2.5 流式细胞仪检测细胞表面P-gp蛋白的表达 | 第25页 |
2.6 荧光共聚焦显微镜分别检测细胞内阿霉素的红色荧光强度和罗丹明123的绿色荧光强度 | 第25-26页 |
2.7 293T细胞的转染、病毒收获与病毒滴度测定 | 第26-27页 |
2.8 嘌呤霉素(Puromycin)最优浓度筛选 | 第27页 |
2.9 慢病毒感染细胞 | 第27页 |
2.10 Western-blot方法检测PARP蛋白及其水解片段CleavedPARP的蛋白表达水平 | 第27页 |
2.11 统计学分析 | 第27-28页 |
结果 | 第28-37页 |
1.人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达高于敏感株MCF-7 细胞 | 第28-29页 |
2.人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR对阿霉素耐药,顺铂、多西他赛的敏感性低于敏感株MCF-7 | 第29-30页 |
3. 膜联蛋白A5敲低序列的构建及下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5基因的表达 | 第30-31页 |
4.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达可以增加其药物敏感性 | 第31-32页 |
5.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达可以增加细胞内阿霉素的荧光强度 | 第32-33页 |
6.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达减弱乳腺癌耐药细胞对药物的外排能力 | 第33-35页 |
7.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达可以促进细胞凋.28(四)讨论 | 第35-37页 |
讨论 | 第37-39页 |
结论 | 第39页 |
参考文献 | 第39-42页 |
综述 | 第42-52页 |
参考文献 | 第49-52页 |
致谢 | 第52-53页 |