| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩写词表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-36页 |
| 1.1 纤维素资源的前景 | 第16-17页 |
| 1.2 纤维素的分子结构 | 第17-18页 |
| 1.3 降解纤维素的微生物 | 第18-21页 |
| 1.3.1 纤维素降解真菌 | 第18-19页 |
| 1.3.2 纤维素降解细菌 | 第19-21页 |
| 1.4 微生物降解纤维素的策略 | 第21-24页 |
| 1.4.1 游离纤维素酶系协同降解纤维素机制 | 第21页 |
| 1.4.2 纤维小体降解纤维素机制 | 第21-23页 |
| 1.4.3 细胞结合型非复合体纤维素降解机制 | 第23-24页 |
| 1.4.4 纤维素氧化降解机制 | 第24页 |
| 1.5 细菌LPS的介绍 | 第24-27页 |
| 1.5.1 脂多糖的结构 | 第24-25页 |
| 1.5.2 脂多糖的合成 | 第25-26页 |
| 1.5.3 脂质A核心-O-抗原连接酶 | 第26-27页 |
| 1.6 哈氏噬纤维菌背景及研究进展 | 第27-32页 |
| 1.6.1 哈氏噬纤维菌的特征及系统发生 | 第27-29页 |
| 1.6.2 哈氏噬纤维菌对纤维素的吸附 | 第29页 |
| 1.6.3 哈氏噬纤维菌的运动 | 第29-31页 |
| 1.6.4 哈氏噬纤维菌中的T9SS分泌系统 | 第31-32页 |
| 1.7 哈氏噬纤维菌的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.8 论文选题来源和工作思路 | 第34-36页 |
| 第二章 Tn4351转座子在Cytophaga hutchinsonii中插入突变筛选菌株以及部分基因的缺陷菌株的构建 | 第36-62页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-50页 |
| 2.1.1 菌种 | 第36页 |
| 2.1.2 质粒与引物 | 第36-39页 |
| 2.1.3 培养基和抗生素溶液的配制 | 第39-40页 |
| 2.1.4 试剂与仪器 | 第40-41页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第41-50页 |
| 2.1.5.1 核酸的提取、回收和纯化 | 第42页 |
| 2.1.5.2 哈氏噬纤维菌感受态的制备 | 第42页 |
| 2.1.5.3 哈氏噬纤维菌的电击转化 | 第42-43页 |
| 2.1.5.4 转化子的挑取验证及保藏 | 第43页 |
| 2.1.5.5 单酶切、自连接环化以及反向PCR确定插入位点 | 第43-47页 |
| 2.1.5.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第47页 |
| 2.1.5.7 双酶切和连接 | 第47页 |
| 2.1.5.8 大肠杆菌的热激转化 | 第47-48页 |
| 2.1.5.9 部分基因缺陷菌株的构建 | 第48-49页 |
| 2.1.5.10 双层纤维平板的点种和滤纸降解实验 | 第49页 |
| 2.1.5.11 软琼脂和硬琼脂扩散实验 | 第49-50页 |
| 2.2 实验结果 | 第50-59页 |
| 2.2.1 筛选到的突变株 | 第50-53页 |
| 2.2.2 反向PCR | 第53-54页 |
| 2.2.3 部分基因缺陷菌株的构建 | 第54-59页 |
| 2.2.3.1 部分基因缺陷菌株纤维素降解能力验证 | 第55-56页 |
| 2.2.3.2 部分基因缺陷菌株的运动能力验证 | 第56-59页 |
| 2.3 讨论 | 第59-62页 |
| 第三章 chu_0602基因功能的研究 | 第62-96页 |
| 3.1 材料与方法 | 第62-74页 |
| 3.1.1 菌种 | 第62页 |
| 3.1.2 质粒和引物 | 第62页 |
| 3.1.3 培养基和抗生素溶及缓冲液的配制 | 第62-63页 |
| 3.1.4 试剂与仪器 | 第63-64页 |
| 3.1.5 实验方法 | 第64-74页 |
| 3.1.5.1 生物信息学分析 | 第64页 |
| 3.1.5.2 双层纤维素平板和滤纸平板降解实验 | 第64-65页 |
| 3.1.5.3 软琼脂和硬琼脂扩散实验 | 第65页 |
| 3.1.5.4 光学显微镜和扫描电子显微镜对chu_0602突变株的观察 | 第65-66页 |
| 3.1.5.5 chu_0602突变株的菌体颜色分析 | 第66页 |
| 3.1.5.6 chu_0602突变株的生物膜 | 第66页 |
| 3.1.5.7 chu_0602突变株的生长曲线的测定 | 第66-67页 |
| 3.1.5.8 chu_0602突变株三种培养底物的酶活的测定 | 第67-68页 |
| 3.1.5.9 菌体蛋白量的测定 | 第68-69页 |
| 3.1.5.10 chu_0602突变株的蛋白提取、SDS-PAGE和质谱分析 | 第69-70页 |
| 3.1.5.11 chu_0602突变株的吸附率的测定 | 第70-71页 |
| 3.1.5.12 chu_0602突变株多糖的研究 | 第71-72页 |
| 3.1.5.13 chu_0602突变株的抗性实验 | 第72页 |
| 3.1.5.14 chu_0602回补菌株的研究 | 第72-73页 |
| 3.1.5.15 chu_0603基因的初步研究 | 第73-74页 |
| 3.2 实验结果 | 第74-94页 |
| 3.2.1 生物信息学分析 | 第74-76页 |
| 3.2.2 双层纤维素平板和滤纸平板降解实验 | 第76-77页 |
| 3.2.3 软琼脂和硬琼脂扩散实验 | 第77页 |
| 3.2.4 光学显微镜和扫描电子显微镜对chu 0602突变株的观察 | 第77-79页 |
| 3.2.4.1 光学显微镜的观察和菌体长度的统计 | 第77-78页 |
| 3.2.4.2 扫描电子显微的观察 | 第78-79页 |
| 3.2.5 chu_0602突变株的菌体颜色分析 | 第79-80页 |
| 3.2.6 chu_0602突变株的生物膜 | 第80-81页 |
| 3.2.7 chu_0602突变株的三种底物生长曲线的测定 | 第81-82页 |
| 3.2.8 chu_0602突变株三种培养底物的酶活的测定 | 第82-86页 |
| 3.2.8.1 内切纤维素酶活的测定 | 第82-84页 |
| 3.2.8.2 β-葡萄糖苷酶活得测定 | 第84-86页 |
| 3.2.9 chu_0602突变株的蛋白提取、SDS-PAGE和质谱分析 | 第86-89页 |
| 3.2.9.1 外膜蛋白的SDS-PAGE与质谱鉴定 | 第87-88页 |
| 3.2.9.2 外膜纤维素吸附蛋白的SDS-PAGE | 第88页 |
| 3.2.9.3 胞外蛋白的SDS-PAGE | 第88-89页 |
| 3.2.10 chu_0602突变株的吸附率的测定 | 第89页 |
| 3.2.11 chu_0602突变株多糖的研究 | 第89-90页 |
| 3.2.11.1 chu_0602突变株荧光白平板实验 | 第89-90页 |
| 3.2.11.2 chu_0602突变株脂多糖的提取、电泳与银染 | 第90页 |
| 3.2.12 chu_0602突变株的抗性实验 | 第90-92页 |
| 3.2.13 chu_0602回补菌株的研究 | 第92-93页 |
| 3.2.13.1 chu_0602突变株的回补 | 第92页 |
| 3.2.13.2 chu_0602回补株脂多糖的提取、电泳和银染 | 第92-93页 |
| 3.2.14 chu_0603基因的初步研究 | 第93-94页 |
| 3.2.14.1 chu_0603敲除株运动能力的验证 | 第93-94页 |
| 3.2.14.2 chu_0603敲除株的纤维素降解能力的验证 | 第94页 |
| 3.3 讨论 | 第94-96页 |
| 全文总结与展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第108页 |
