| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 乳酸菌细菌素 | 第13-21页 |
| 1.1.1 乳酸菌细菌素的多样性 | 第14-16页 |
| 1.1.2 乳酸菌细菌素的结构与作用机制 | 第16-17页 |
| 1.1.3 乳酸菌细菌素的遗传学研究 | 第17-19页 |
| 1.1.4 乳酸菌细菌素的群体效应调控 | 第19-20页 |
| 1.1.5 乳酸菌细菌素抗性机理及免疫机理的研究 | 第20-21页 |
| 1.1.6 乳酸菌细菌素的工业化应用 | 第21页 |
| 1.2 副干酪乳杆菌群体效应研究概况 | 第21-23页 |
| 1.3 基因敲除技术概述 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的主要技术路线 | 第25页 |
| 1.6 课题资助名称 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-70页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-34页 |
| 2.1.1 供试菌株及质粒载体 | 第26-29页 |
| 2.1.2 PCR扩增引物 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要分子生物学及生化试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.5 主要缓冲液及试剂配制 | 第32-34页 |
| 2.2 试验方法 | 第34-70页 |
| 2.2.1 L. paracasei HD1.7 细菌基因组的提取及浓度测定 | 第34页 |
| 2.2.2 prcK基因的克隆及测序 | 第34-37页 |
| 2.2.3 prcA基因的克隆及测序 | 第37-38页 |
| 2.2.4 测定氨苄青霉素、四环素、卡那霉素以及红霉素杀伤曲线 | 第38-39页 |
| 2.2.5 构建自杀质粒pYTKA | 第39-48页 |
| 2.2.6 构建自杀质粒pYTKLKRT | 第48-55页 |
| 2.2.7 构建自杀质粒pYTRLRRT | 第55-61页 |
| 2.2.8 构建自杀质粒pYTKRT | 第61-64页 |
| 2.2.9 构建自杀质粒pYTRT | 第64-66页 |
| 2.2.10 制备L. paracasei HD1.7 感受态细胞 | 第66页 |
| 2.2.11 自杀质粒及阳性对照质粒pMG36e电转化L. paracasei HD1.7 感受态细胞 | 第66-68页 |
| 2.2.12 prcK、prcR基因敲除突变株的构建 | 第68-69页 |
| 2.2.13 突变株生长及其发酵液抑菌情况 | 第69-70页 |
| 第3章 结果与分析 | 第70-134页 |
| 3.1 L. paracasei HD1.7 基因组的提取 | 第70页 |
| 3.2 prcK基因的克隆 | 第70-71页 |
| 3.3 prcK基因生物信息学分析 | 第71-85页 |
| 3.3.1 prcK基因ORF分析 | 第71-72页 |
| 3.3.2 prcK基因同源性分析 | 第72-78页 |
| 3.3.3 一级结构分析 | 第78-81页 |
| 3.3.4 二级结构和功能分析 | 第81-85页 |
| 3.3.5 三级结构预测 | 第85页 |
| 3.4 prcA基因的克隆 | 第85-86页 |
| 3.5 prcA基因生物信息学分析 | 第86-96页 |
| 3.5.1 prcA基因ORF分析 | 第86-87页 |
| 3.5.2 prcA基因同源性分析 | 第87-91页 |
| 3.5.3 一级结构分析 | 第91-92页 |
| 3.5.4 二级结构和功能分析 | 第92-96页 |
| 3.6 各类抗生素对L. paracasei HD1.7、E. coli DH5α 和E. coli JM109最低抑菌浓度的测定 | 第96-98页 |
| 3.6.1 各类抗生素对L.paracasei HD1.7 的杀伤曲线 | 第96-97页 |
| 3.6.2 各类抗生素对E. coli DH5α 的杀伤曲线 | 第97页 |
| 3.6.3 红霉素对E. coli JM109的杀伤曲线 | 第97-98页 |
| 3.7 自杀质粒pYTKA的构建 | 第98-104页 |
| 3.7.1 prcK基因部分片段的克隆 | 第98-99页 |
| 3.7.2 重组质粒p2NIL-prcK2的构建 | 第99-101页 |
| 3.7.3 Ampr基因的克隆 | 第101页 |
| 3.7.4 自杀质粒pYTKA的构建 | 第101-104页 |
| 3.8 自杀质粒pYTKLKRT的构建 | 第104-111页 |
| 3.8.1 prcK基因左侧片段的克隆 | 第104页 |
| 3.8.2 重组质粒pUC18-KL的构建 | 第104-106页 |
| 3.8.3 prcK基因右侧片段的克隆 | 第106-107页 |
| 3.8.4 重组质粒pUC18-KLKR的构建 | 第107-109页 |
| 3.8.5 Tetr基因的克隆 | 第109页 |
| 3.8.6 自杀质粒pYTKLKRT的构建 | 第109-111页 |
| 3.9 自杀质粒pYTRLRRT的构建 | 第111-118页 |
| 3.9.1 prcR基因左侧片段的克隆 | 第111-112页 |
| 3.9.2 重组质粒pUC18-RL的构建 | 第112-114页 |
| 3.9.3 prcR基因右侧片段的克隆 | 第114页 |
| 3.9.4 重组质粒pUC18-RLRR的构建 | 第114-116页 |
| 3.9.5 自杀质粒pYTRLRRT的构建 | 第116-118页 |
| 3.10 自杀质粒pYTKRT的构建 | 第118-121页 |
| 3.10.1 重组质粒pUC18-KLRR的构建 | 第118-119页 |
| 3.10.2 自杀质粒pYTKLRRT的构建 | 第119-121页 |
| 3.11 自杀质粒pYTRT的构建 | 第121-123页 |
| 3.11.1 质粒p2NIL和质粒pUC18-prcR-tet的酶切结果 | 第121页 |
| 3.11.2 自杀质粒pYTRT阳性转化子的筛选与鉴定 | 第121-123页 |
| 3.12 利用质粒pMG36e优化L. paracasei HD1.7 电转化方法 | 第123-125页 |
| 3.12.1 不同电压对电转化效率的影响 | 第123-124页 |
| 3.12.2 高渗复苏培养基对电转化效率的影响 | 第124页 |
| 3.12.3 感受态细胞低温保存时间长短对电转化效率的影响 | 第124-125页 |
| 3.13 prcK、prcR基因敲除突变株的筛选与鉴定 | 第125-132页 |
| 3.13.1 prcK基因敲除突变株的筛选 | 第125-126页 |
| 3.13.2 prcK基因敲除突变株的鉴定 | 第126-127页 |
| 3.13.3 prcR基因敲除突变株的筛选 | 第127-128页 |
| 3.13.4 prcR基因敲除突变株的鉴定 | 第128-130页 |
| 3.13.5 prcKprcR双基因敲除突变株的筛选 | 第130页 |
| 3.13.6 prcKprcR双基因敲除突变株的鉴定 | 第130-132页 |
| 3.14 突变株生长及其发酵液抑菌情况 | 第132-134页 |
| 3.14.1 突变株的生长测定 | 第132-133页 |
| 3.14.2 突变株发酵液抑菌情况的测定 | 第133-134页 |
| 第4章 讨论 | 第134-143页 |
| 4.1 prcK基因的克隆 | 第134页 |
| 4.2 prcK基因生物信息学分析 | 第134-135页 |
| 4.3 prcA基因的克隆 | 第135页 |
| 4.4 prcA基因生物信息学分析 | 第135-136页 |
| 4.5 prcK、prcR基因敲除载体的构建 | 第136-138页 |
| 4.6 L. paracasei HD1.7 电转化条件摸索 | 第138-140页 |
| 4.7 基因敲除突变株的鉴定 | 第140-141页 |
| 4.8 基因敲除突变株的生长及其发酵液抑菌情况的测定 | 第141-142页 |
| 4.9 工作设想 | 第142-143页 |
| 第5章 结论 | 第143-144页 |
| 参考文献 | 第144-155页 |
| 附录 1 | 第155-156页 |
| 附录 2 | 第156-157页 |
| 附录 3 | 第157-158页 |
| 附录 4 | 第158-159页 |
| 附录 5 | 第159-160页 |
| 附录 6 | 第160-162页 |
| 附录 7 | 第162-163页 |
| 附录 8 | 第163-164页 |
| 附录 9 | 第164-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文 | 第166页 |
