| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 VB_(12)概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 VB_(12)的理化性质 | 第14页 |
| 1.1.2 VB_(12)的生理作用 | 第14-15页 |
| 1.1.3 VB_(12)来源途径 | 第15页 |
| 1.1.4 VB_(12)日推荐量与强化食品现状 | 第15-16页 |
| 1.2 VB_(12)检测方法的研究现状 | 第16-22页 |
| 1.2.1 微生物法 (Microbiological assay) | 第16-17页 |
| 1.2.2 分光光度计法（Spectrometer） | 第17页 |
| 1.2.3 高效液相色谱法（High performance liquid chromatography） | 第17-18页 |
| 1.2.4 原子吸收光谱法 (Atomic Absorption Spectroscopy) | 第18页 |
| 1.2.5 毛细管电泳法 (High Performance Capillary Electrophoresis) | 第18-19页 |
| 1.2.6 生物传感器法（Biosensor） | 第19页 |
| 1.2.7 化学发光法（Chemiluminescence） | 第19页 |
| 1.2.8 免疫分析法 (Immunoassay) | 第19-22页 |
| 1.2.8.1 放射免疫分析法 (Radioimmunoassay) | 第20页 |
| 1.2.8.2 酶联免疫吸附法 (Enzyme-linked immunosorbent assay) | 第20-21页 |
| 1.2.8.3 免疫化学发光法（Chemiluminescence immunoassay） | 第21页 |
| 1.2.8.4 胶体金免疫层析法（Gold immunochromatography assay） | 第21-22页 |
| 1.3 本课题研究的意义 | 第22页 |
| 1.4 本课题研究思路 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题的研究内容 | 第23-24页 |
| 第2章 VB_(12)人工抗原的合成与鉴定 | 第24-31页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验药品与材料 | 第24页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验溶液 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.2.1 VB_(12)人工抗原的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.2 人工抗原偶联比测定 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-29页 |
| 2.3.1 VB_(12)免疫抗原与包被抗原的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.2 偶联比测定 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.4.1 偶联方法的选择 | 第29页 |
| 2.4.2 载体蛋白的选择 | 第29-30页 |
| 2.5 本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 单克隆抗体的制备 | 第31-44页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第32页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 免疫 | 第33页 |
| 3.2.2 血清效价测定 | 第33-34页 |
| 3.2.3 小鼠抗VB_(12)抗体灵敏度测定 | 第34页 |
| 3.2.4 VB_(12)单克隆抗体制备 | 第34-40页 |
| 3.2.4.1 骨髓瘤细胞的准备 | 第34-35页 |
| 3.2.4.2 小鼠脾脏细胞的准备 | 第35页 |
| 3.2.4.3 饲养细胞的制备 | 第35页 |
| 3.2.4.4 细胞融合 | 第35-36页 |
| 3.2.4.5 杂交瘤细胞的筛选 | 第36-37页 |
| 3.2.4.6 杂交瘤细胞分泌抗体的鉴定 | 第37页 |
| 3.2.4.7 杂交瘤细胞的克隆化 | 第37-38页 |
| 3.2.4.8 杂交瘤细胞的冻存 | 第38页 |
| 3.2.4.9 杂交瘤细胞的复苏 | 第38页 |
| 3.2.4.10 单克隆抗体的大量生产 | 第38-39页 |
| 3.2.4.11 VB_(12)抗体的纯化 | 第39页 |
| 3.2.4.12 辛酸硫酸铵法提纯抗体 | 第39页 |
| 3.2.4.13 蛋白柱纯化抗体 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 免疫小鼠血清的测定 | 第40-41页 |
| 3.3.2 细胞融合 | 第41页 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞的筛选以及亚型测定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 小鼠腹水中抗体含量的测定 | 第42-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 VB_(12)免疫学检测方法的建立以及验证 | 第44-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第45页 |
| 4.1.3 溶液配制 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 最佳包被抗原与抗体稀释倍数的确定 | 第45-46页 |
| 4.2.2 间接竞争ELISA反应体系的优化 | 第46页 |
| 4.2.3 间接竞争ELISA方法确立 | 第46页 |
| 4.2.4 VB_(12)抗体特异性的测定 | 第46页 |
| 4.2.5 加标回收实验 | 第46-47页 |
| 4.2.5.1 VB_(12)在片状样品中回收率的测定 | 第46-47页 |
| 4.2.5.2 VB_(12)在粉末状食品中回收率的测定 | 第47页 |
| 4.2.5.3 饮料样品加标回收的测定 | 第47页 |
| 4.2.6 免疫亲和柱联合高效液相法验证 | 第47-49页 |
| 4.2.6.1 色谱条件 | 第47-48页 |
| 4.2.6.2 标准曲线绘制 | 第48页 |
| 4.2.6.3 样品净化与浓缩 | 第48-49页 |
| 4.2.6.4 实际样品的检测 | 第49页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第49-61页 |
| 4.3.1 抗原抗体最佳浓度比例 | 第49-50页 |
| 4.3.2 标准品溶液体系的优化 | 第50-52页 |
| 4.3.2.1 pH对抗原抗体结合影响 | 第50页 |
| 4.3.2.2 有机溶剂对抗原抗体结合的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.2.3 盐离子浓度对抗原抗体的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 ELISA工作曲线范围的确定 | 第52-53页 |
| 4.3.4 单抗特异性的测定 | 第53-55页 |
| 4.3.5 加标回收的测定 | 第55-56页 |
| 4.3.6 常用VB_(12)片的检测 | 第56-57页 |
| 4.3.7 高效液相色谱法验证 | 第57-58页 |
| 4.3.8 免疫亲和柱上样液的优化 | 第58-59页 |
| 4.3.9 回收率的测定 | 第59-60页 |
| 4.3.10 未知片状样品检测 | 第60页 |
| 4.3.11 HPLC与ELISA的比较 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第5章 化学发光酶联免疫吸附法的建立 | 第62-69页 |
| 5.1 实验材料与设备 | 第62-63页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.1.2 溶液配制 | 第63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-64页 |
| 5.2.1 方阵滴定 | 第63页 |
| 5.2.2 竞争酶免化学分析法 | 第63-64页 |
| 5.2.3 样品加标与实际样品检测 | 第64页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第64-67页 |
| 5.3.1 抗原浓度的确定 | 第64页 |
| 5.3.2 抗体浓度的确定 | 第64-65页 |
| 5.3.3 加标回收率的测定 | 第65-66页 |
| 5.3.4 实际样品的检测 | 第66-67页 |
| 5.4 本章小结 | 第67-69页 |
| 第6章 化学发光免疫分析法检测VB_(12) | 第69-81页 |
| 6.1 | 第69-74页 |
| 6.1.1 吖啶酯标记抗体发光法检测VB_(12) | 第69-70页 |
| 6.1.1.1 实验材料与设备 | 第69页 |
| 6.1.1.2 主要缓冲液 | 第69-70页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第70-71页 |
| 6.1.2.1 抗体的标记 | 第70页 |
| 6.1.2.2 抗原抗体反应比例的优化 | 第70-71页 |
| 6.1.2.3 VB_(12)竞争CLIA | 第71页 |
| 6.1.3 结果与讨论 | 第71-73页 |
| 6.1.3.1 方阵滴定 | 第71-72页 |
| 6.1.3.2 CLIA法竞争抑制率曲线 | 第72-73页 |
| 6.1.4 本章小结 | 第73-74页 |
| 6.2 抗VB_(12)/NSP-SA双特异性抗体化学发光法 | 第74-81页 |
| 6.2.0 试剂与材料 | 第74页 |
| 6.2.1 缓冲液配制 | 第74-75页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第75-77页 |
| 6.2.2.1 抗VB_(12)/AE双特异性抗体的制备 | 第75-76页 |
| 6.2.2.2 吖啶酯发光偶联物的制备 | 第76页 |
| 6.2.2.3 方阵滴定 | 第76-77页 |
| 6.2.2.4 双特异性抗体法间接竞争CLIA | 第77页 |
| 6.2.3 结果与讨论 | 第77-80页 |
| 6.2.3.1 双特异性抗体的鉴定 | 第77-78页 |
| 6.2.3.2 抗原浓度的确定 | 第78页 |
| 6.2.3.3 最佳吖啶酯抗原反应比例的选择 | 第78-79页 |
| 6.2.3.4 VB_(12)的CLIA竞争曲线 | 第79-80页 |
| 6.2.4 本章小结 | 第80-81页 |
| 第7章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 7.1 结论 | 第81页 |
| 7.2 进一步工作的方向 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
