| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-32页 |
| 1.胚胎早期发育中的相关问题 | 第17页 |
| 1.1 发育阻滞与胚胎基因组的激活 | 第17页 |
| 1.2 早期胚胎发育的影响因子 | 第17页 |
| 2.绵羊胚胎附植机理及相关影响因素的研究进展 | 第17-26页 |
| 2.1 胚胎附植 | 第18-22页 |
| 2.2 影响胚胎附植相关因素的研究进展 | 第22-26页 |
| 3.激活转录因子 4（ATF4）的研究背景及生物学功能 | 第26-31页 |
| 3.1 ATF/CREB家族蛋白的研究 | 第27页 |
| 3.2 ATF4的结构 | 第27页 |
| 3.3 ATF4的二聚化配体和相互作用的蛋白 | 第27页 |
| 3.4 ATF4的合成与降解 | 第27-28页 |
| 3.5 ATF4的生物学功能 | 第28-31页 |
| 4.研究的目的与意义 | 第31页 |
| 5.研究的主要内容 | 第31-32页 |
| 第二章 试验研究 | 第32-108页 |
| 试验一 ATF4基因在胚胎附植期绵羊子宫内膜的时空表达模式 | 第32-50页 |
| 1.材料与方法 | 第33-40页 |
| 1.1 材料 | 第33-35页 |
| 1.2 方法 | 第35-40页 |
| 2.结果 | 第40-47页 |
| 2.1 子宫组织总RNA的提取结果 | 第40页 |
| 2.2 引物特异性检测 | 第40-41页 |
| 2.3 琼脂糖电泳检测定量引物扩增特异性结果 | 第41页 |
| 2.4 妊娠早期绵羊子宫内膜的HE染色结果分析 | 第41-43页 |
| 2.5 ATF4 mRNA在胚胎附植期和发情周期绵羊子宫内膜的时空表达模式 | 第43-45页 |
| 2.6 ATF4 protein在子宫内膜组织的时空表达 | 第45-46页 |
| 2.7 ATF4 protein在绵羊子宫内膜组织的表达及定位 | 第46-47页 |
| 3.讨论 | 第47-49页 |
| 4.小结 | 第49-50页 |
| 试验二 绵羊子宫内膜基质细胞的分离、培养及鉴定 | 第50-60页 |
| 1.材料与方法 | 第50-54页 |
| 1.1 材料 | 第50-52页 |
| 1.2 方法 | 第52-54页 |
| 2.结果 | 第54-58页 |
| 2.1 基质细胞的生长过程及形态特征 | 第54-55页 |
| 2.2 波形蛋白和角蛋白的定性检测 | 第55-57页 |
| 2.3 基质细胞冷冻前后的形态特征与生长特性 | 第57-58页 |
| 2.4 子宫内膜容受性标记分子的表达 | 第58页 |
| 3.讨论 | 第58-59页 |
| 3.1 绵羊子宫内膜基质细胞体外分离培养的方法 | 第58-59页 |
| 3.2 绵羊子宫内膜基质细胞标记性蛋白的定性表达 | 第59页 |
| 3.3 骨桥蛋白与β3-整合素在基质细胞中的表达检测 | 第59页 |
| 4.小结 | 第59-60页 |
| 试验三 ATF4对绵羊子宫内膜蜕膜化进程的功能研究 | 第60-91页 |
| 第一节 绵羊ATF4基因真核表达载体的构建 | 第60-71页 |
| 1.材料与方法 | 第60-68页 |
| 1.1 材料 | 第60-61页 |
| 1.2 方法 | 第61-68页 |
| 2.结果 | 第68-70页 |
| 2.1 总RNA提取与cDNA合成 | 第68-69页 |
| 2.2 菌落PCR鉴定重组质粒 | 第69-70页 |
| 2.4 质粒测序结果 | 第70页 |
| 2.5 菌液Western blot检测ATF4蛋白的表达 | 第70页 |
| 3.讨论 | 第70-71页 |
| 4.小结 | 第71页 |
| 第二节 绵羊ATF4基因干涉载体的构建 | 第71-82页 |
| 1.材料与方法 | 第72-76页 |
| 1.1 材料 | 第72页 |
| 1.2 方法 | 第72-76页 |
| 2.结果 | 第76-81页 |
| 2.1 重组质粒的PCR鉴定 | 第76-77页 |
| 2.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第77-78页 |
| 2.3 重组质粒的测序鉴定 | 第78页 |
| 2.4 过表达及干扰效果的鉴定 | 第78页 |
| 2.5 子宫内膜基质细胞提取RNA结果 | 第78-79页 |
| 2.6 Real-time PCR检测ATF4基因的过表达及干扰效果 | 第79-80页 |
| 2.7 Western blot检测ATF4基因过表达及干扰效率 | 第80-81页 |
| 3.讨论 | 第81-82页 |
| 4.小结 | 第82页 |
| 第三节 ATF4对绵羊子宫内膜蜕膜化进程的影响 | 第82-91页 |
| 1.材料与方法 | 第83-85页 |
| 1.1 材料 | 第83页 |
| 1.2 方法 | 第83-85页 |
| 2.结果 | 第85-91页 |
| 2.1 基质细胞的蜕膜化诱导及标志物的表达 | 第85-86页 |
| 2.2 绵羊子宫蜕膜基质细胞中ATF4的表达 | 第86-88页 |
| 2.3 基质细胞转染后细胞形态的观察 | 第88页 |
| 2.4 检测蜕膜基质细胞中ATF4 mRNA和protein的表达 | 第88-89页 |
| 2.5 ATF4影响基质细胞的蜕膜化进程 | 第89页 |
| 2.6 PRL的扩增曲线及熔解曲线 | 第89-90页 |
| 2.7 PRL的特异性扩增条带 | 第90-91页 |
| 3.讨论 | 第91页 |
| 4.小结 | 第91页 |
| 试验四 ATF4影响绵羊子宫内膜蜕膜化进程的分子机理 | 第91-98页 |
| 1.材料与方法 | 第93-94页 |
| 1.1 材料 | 第93页 |
| 1.2 方法 | 第93-94页 |
| 2.结果 | 第94-96页 |
| 3.讨论 | 第96-97页 |
| 4.小结 | 第97-98页 |
| 试验五 ATF4在绵羊体外受精胚胎中的表达分析 | 第98-108页 |
| 1.材料与方法 | 第98-102页 |
| 1.1 材料 | 第98-99页 |
| 1.2 方法 | 第99-102页 |
| 2.结果 | 第102-105页 |
| 2.1 RT-PCR引物检测 | 第102-103页 |
| 2.2 微量RNA实时荧光定量表达分析（图 5-3） | 第103-105页 |
| 3.讨论 | 第105-106页 |
| 4.小结 | 第106-108页 |
| 全文总结 | 第108-109页 |
| 创新点 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 作者简介 | 第125-126页 |
| 导师评阅表 | 第126-128页 |
| 附录一 | 第128-132页 |
| 1 pcDNA3.1-ATF4（过表达质粒构建测序结果）（峰值图） | 第128-130页 |
| 2 pcDNA3.1-ATF4质粒的测序序列比较分析图 | 第130-132页 |
| 附录二 | 第132-135页 |
| 1 干扰片段的测序峰值图 | 第132-134页 |
| 2 shRNA测序结果序列比对 | 第134-135页 |
