| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 植物倍半萜合酶研究进展 | 第10-17页 |
| 1.1.1 萜类化合物简介 | 第10页 |
| 1.1.2 萜类合酶的结构 | 第10-13页 |
| 1.1.3 倍半萜稀合酶的催化机理 | 第13-15页 |
| 1.1.4 几个倍半萜合酶研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-26页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 快速定点突变 | 第20-21页 |
| 2.2.2 Rosetta（DE3）感受态细胞制备 | 第21页 |
| 2.2.3 感受态细胞的转化 | 第21-22页 |
| 2.2.4 质粒提取 | 第22页 |
| 2.2.5 蛋白表达和纯化 | 第22页 |
| 2.2.6 Bradford方法测定蛋白质浓度 | 第22-23页 |
| 2.2.7 Malachite Green测定无机磷酸法测定倍半萜合酶动力学常数 | 第23-24页 |
| 2.2.8 蛋白体外催化反应 | 第24-26页 |
| 第3章 紫穗槐二烯合酶RXR motif在催化产物特异性中的作用 | 第26-39页 |
| 3.1 菌株、载体和试剂 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-27页 |
| 3.2.1 ADS基因突变位点 | 第26页 |
| 3.2.2 突变体基因大肠杆菌感受态细胞表达纯化 | 第26-27页 |
| 3.2.3 突变体蛋白体外催化分析 | 第27页 |
| 3.2.4 突变体蛋白酶动力学测定 | 第27页 |
| 3.3 实验结果 | 第27-34页 |
| 3.3.1 ADS基因突变体 | 第27-28页 |
| 3.3.2 ADS突变体质粒大肠杆菌表达和纯化 | 第28页 |
| 3.3.3 R262K突变蛋白催化产物分析 | 第28页 |
| 3.3.4 R264K,R262L突变体催化产物分析 | 第28-30页 |
| 3.3.5 T296A-R262K、T296V-R262K、T296I-R262K双突变突变体催化产物分析 | 第30-33页 |
| 3.3.6 R262K、R264K突变体酶动力学分析 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-39页 |
| 第4章 马兜铃烯合酶RXR motif在催化产物特异性中的作用 | 第39-46页 |
| 4.1 菌种、载体和试剂 | 第39页 |
| 4.2 方法 | 第39-40页 |
| 4.2.1 TEAS基因点突变 | 第39-40页 |
| 4.2.2 TEAS突变体大肠杆菌表达和纯化 | 第40页 |
| 4.2.3 TEAS突变体纯化蛋白体外催化产物分析 | 第40页 |
| 4.2.4 TEAS突变体酶动力学测定 | 第40页 |
| 4.3 结果 | 第40-44页 |
| 4.3.1 TEAS基因点突变 | 第40页 |
| 4.3.2 TEAS突变体大肠杆菌表达和纯化 | 第40-41页 |
| 4.3.3 TEAS-R264K、R266K催化产物分析 | 第41-43页 |
| 4.3.4 TEAS、R264K、R266K动力学分析 | 第43-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 在读期间公开发表的学术论文 | 第58页 |
