| 中文摘要 | 第7-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一部分 SLE患者外周血单个核细胞Tim-1及Tim-3基因的表达 | 第17-48页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 技术路线 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-28页 |
| 一 材料 | 第21页 |
| 1 主要试剂 | 第21页 |
| 2 一般试剂 | 第21页 |
| 3 DNA分子量 | 第21页 |
| 二 主要仪器 | 第21-22页 |
| 三 方法 | 第22-27页 |
| 1 病例及对照人群的建立 | 第22页 |
| 2 Ficoll法分离外周血单个核细胞 | 第22-23页 |
| 3 淋巴细胞的体外培养 | 第23页 |
| 4 总RNA的抽提—Trizol法 | 第23页 |
| 5 逆转录 | 第23-24页 |
| 6 PCR引物的设计及合成 | 第24-25页 |
| 7 荧光实时定量RT-PCR | 第25-26页 |
| 8 淋巴细胞增殖试验(CCK-8检测法) | 第26-27页 |
| 四 统计学处理 | 第27-28页 |
| 结果 | 第28-31页 |
| 1 SLE患者PBMC中Tim-1及Tim-3 mRNA的表达 | 第28页 |
| 2 Tim-1及Tim-3的表达与SLE患者的活动指数的相关性分析 | 第28页 |
| 3 SLE患者Tim基因的表达与Th1／Th2细胞因子表达的相关性分析 | 第28-29页 |
| 3．1 SLE患者Tim-1与TL-10的表达具有相关性 | 第29页 |
| 3．2 SLE患者Tim-3的表达与IFN-γ具有相关性 | 第29页 |
| 4 SLE患者PBMC中Tim基因及细胞因子表达的动力学分析 | 第29页 |
| 5 SLE患者galectin-9 mRNA的表达 | 第29页 |
| 6 SLE患者TGF-β1及FoxP3 mRNA的表达 | 第29-30页 |
| 7 SLE患者淋巴细胞增殖活性降低 | 第30-31页 |
| 讨论 | 第31-37页 |
| 一 Tim mRNA表达水平与SLE | 第32-33页 |
| 二 IL-10及IFN-γ mRNA表达水平与SLE | 第33页 |
| 三 galectin-9 mRNA表达水平与SLE | 第33-34页 |
| 四 TGF-β及FoxP3 mRNA表达水平与SLE | 第34-35页 |
| 五 淋巴细胞增殖能力与SLE | 第35-37页 |
| 结论与展望 | 第37-38页 |
| 附图 | 第38-48页 |
| 第二部分 人Tim-3基因的克隆 | 第48-63页 |
| 前言 | 第48-49页 |
| 技术路线 | 第49-50页 |
| 材料与方法 | 第50-57页 |
| 一 材料 | 第50-52页 |
| 1 载体与菌种 | 第50页 |
| 2 主要试剂 | 第50页 |
| 3 试剂盒 | 第50页 |
| 4 DNA分子量 | 第50页 |
| 5 PCR引物 | 第50-51页 |
| 6 一般试剂 | 第51-52页 |
| 二 主要仪器 | 第52页 |
| 三 方法 | 第52-57页 |
| 1 Ficoll法分离外周血单个核细胞 | 第52页 |
| 2 总RNA的抽提 | 第52页 |
| 3 逆转录 | 第52页 |
| 4 PCR扩增目的片段hTim-3 | 第52-53页 |
| 5 PCR扩增产物的琼脂凝胶电泳 | 第53页 |
| 6 目的基因片断hTim-3的大量回收 | 第53页 |
| 7 目的基因hTim-3与载体pGEM-T的连接 | 第53-54页 |
| 7．1 加A反应 | 第53-54页 |
| 7．2 DNA沉淀 | 第54页 |
| 7．3 连接 | 第54页 |
| 8 连接产物的转化 | 第54-55页 |
| 8．1 感受态细菌的制备 | 第54-55页 |
| 8．2 连接产物的转化 | 第55页 |
| 9 QIAprep Spin minprep试剂盒抽取质粒DNA | 第55-56页 |
| 10 克隆载体hTim-3—pGEM-T的鉴定 | 第56页 |
| 10．1 克隆载体hTim-3—pGEM-T的酶切鉴定 | 第56页 |
| 10．2 克隆载体hTim-3—pGEM-T的测序鉴定 | 第56页 |
| 11 克隆载体hTim-3—pGEM-T的保存 | 第56-57页 |
| 结果 | 第57-60页 |
| 1 目的基因hTim-3的PCR扩增 | 第57页 |
| 2 克隆载体hTim-3—pGEM-T的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| 3 克隆载体hTim-3—pGEM-T的测序鉴定 | 第58-60页 |
| 讨论 | 第60-62页 |
| 引物设计的原则 | 第60-61页 |
| TA克隆 | 第61-62页 |
| 结论与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 发表论文及论著目录 | 第72-73页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第73页 |
