| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-32页 |
| 1.1 引言 | 第11-13页 |
| 1.2 丝状真菌的转化系统 | 第13-21页 |
| 1.2.1 丝状真菌转化方法 | 第13-17页 |
| 1.2.2 选择标记 | 第17-18页 |
| 1.2.3 丝状真菌的表达载体 | 第18-19页 |
| 1.2.4 转化DNA的整合 | 第19-21页 |
| 1.3 透明颤菌血红蛋白概述 | 第21-26页 |
| 1.3.1 透明颤菌血红蛋白研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.2 VHb基因组成及VHb蛋白的结构 | 第22-24页 |
| 1.3.3 VHb的生理功能 | 第24-25页 |
| 1.3.4 VHb的应用及前景 | 第25-26页 |
| 1.4 重组糖蛋白的生产及表达宿主的选择与改造 | 第26-31页 |
| 1.4.1 糖蛋白概述 | 第26-28页 |
| 1.4.2 重组人源糖蛋白的生产 | 第28页 |
| 1.4.3 真菌表达系统糖基化途径改造进展 | 第28-31页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 T.reesei pyrG基因缺陷株的筛选 | 第32-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第32-33页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.1.3 培养基及培养条件 | 第33页 |
| 2.1.4 90％紫外线致死照射剂量的确定 | 第33页 |
| 2.1.5 菌株的紫外线诱变 | 第33-34页 |
| 2.1.6 Uridine依赖突变株筛选 | 第34页 |
| 2.1.7 T.reesei Uridine依赖突变株的转化 | 第34-35页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第35-37页 |
| 2.2.1 紫外线对孢子的90％致死照射剂量 | 第35-36页 |
| 2.2.2 Uridine依赖突变株的筛选 | 第36页 |
| 2.2.3 Uridine依赖突变株的转化验证 | 第36-37页 |
| 2.3 本章小节 | 第37-38页 |
| 第三章 VHb和人GnTI在T.reesei中的表达研究 | 第38-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 培养基及培养条件 | 第38-39页 |
| 3.1.4 重组DNA技术 | 第39-40页 |
| 3.1.5 重组质粒pCGNT和pUCGV的构建 | 第40页 |
| 3.1.6 pAB4-1和pUCGV共转化T.reesei | 第40页 |
| 3.1.7 T.reesei潮霉素抗性转化法 | 第40页 |
| 3.1.8 pAN7-1和pUCGV共转化T.reesei | 第40-41页 |
| 3.1.9 T.reesei转化子孢子的收集和保存 | 第41页 |
| 3.1.10 T.reesei染色体DNA的提取与纯化 | 第41页 |
| 3.1.11 转化子的PCR验证 | 第41-42页 |
| 3.1.12 转化子的Dot Blot和Southern Blot杂交分析 | 第42页 |
| 3.1.13 转化子的RT-PCR分析 | 第42-43页 |
| 3.1.14 T.reesei胞内蛋白SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| 3.1.15 CO差光谱法分析VHb活性 | 第43页 |
| 3.1.16 T.reesei低氧环境生长曲线分析 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第44-55页 |
| 3.2.1 表达载体的构建 | 第44-48页 |
| 3.2.2 T.reesei转化 | 第48-49页 |
| 3.2.3 PCR方法挑选T.reesei阳性转化子 | 第49页 |
| 3.2.4 Dot Blot和Southern Blot杂交分析 | 第49-51页 |
| 3.2.5 转化子的RT-PCR验证 | 第51-52页 |
| 3.2.6 转化子胞内总蛋白SDS-PAGE分析 | 第52-53页 |
| 3.2.7 CO差光谱法分析VHb活性 | 第53-54页 |
| 3.2.8 转化子在低氧环境下的生长分析 | 第54-55页 |
| 3.3 本章小节 | 第55-56页 |
| 第四章 整合型共表达载体的构建及转化实验 | 第56-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 培养基及培养条件 | 第56-57页 |
| 4.1.4 重组DNA技术 | 第57页 |
| 4.1.5 重组质粒pUCNV的构建 | 第57页 |
| 4.1.6 pUCNV转化T.reesei | 第57页 |
| 4.1.7 T.reesei转化子孢子的收集和保存 | 第57页 |
| 4.1.8 PCR检测 | 第57-58页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第58-60页 |
| 4.2.1 pUCNV的构建及验证 | 第58-60页 |
| 4.2.2 pUCNV转化T.reesei | 第60页 |
| 4.2.3 转化子的筛选与验证 | 第60页 |
| 4.3 本章小节 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 在读期间发表主要文章 | 第67页 |
