| 摘要 | 第6-9页 |
| Absbact | 第9-11页 |
| 中英文缩写对照表 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-41页 |
| 1.1 朊病毒病 | 第19-33页 |
| 1.1.1 朊病毒病概述 | 第19-21页 |
| 1.1.2 朊蛋白的结构和功能 | 第21-24页 |
| 1.1.3 朊病毒的传播和致病机理 | 第24-26页 |
| 1.1.4 朊病毒相关转基因小鼠 | 第26-27页 |
| 1.1.5 PrP毒性肽106-126 | 第27-28页 |
| 1.1.6 朊病毒病的细胞模型 | 第28-29页 |
| 1.1.7 其他疾病中朊病毒病样的传播形式 | 第29-31页 |
| 1.1.8 朊病毒病的辅助诊断、检测和治疗 | 第31-33页 |
| 1.2 Polo样激酶 | 第33-41页 |
| 1.2.1 PLK的发现 | 第33-34页 |
| 1.2.2 PLK的结构及生物学功能 | 第34-35页 |
| 1.2.3 PLKs的表达和功能 | 第35-36页 |
| 1.2.4 PLK1/3的底物及其在G2/M期的作用 | 第36-38页 |
| 1.2.5 PLK1/3在肿瘤组织中的表达变化及治疗 | 第38-39页 |
| 1.2.6 PLKs与神经退行性疾病 | 第39页 |
| 1.2.7 细胞周期再进入与神经退行性疾病 | 第39-41页 |
| 第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义 | 第41-44页 |
| 2.1 研究目的 | 第41页 |
| 2.2 研究方法 | 第41页 |
| 2.3 实验设计方案 | 第41-42页 |
| 2.3.1 朊病毒病仓鼠脑组织中PLKs信号通路的变化 | 第41页 |
| 2.3.2 PLKs在脑组织中的细胞定位与分布 | 第41-42页 |
| 2.3.3 PrP毒性片段106-126处理细胞后PLKs及底物和细胞周期的变化 | 第42页 |
| 2.3.4 PLK1/3与PrP~C、PrP~(Sc)的相互作用及作用区域 | 第42页 |
| 2.3.5 PLK3致神经细胞凋亡作用机制的初步研究 | 第42页 |
| 2.4 本研究的意义 | 第42-44页 |
| 第三章 朊病毒病中PLK1/3信号介导神经元细胞周期的阻滞 | 第44-72页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第45-48页 |
| 3.1.1 主要仪器及设备 | 第45页 |
| 3.1.2 主要化学试剂,试剂盒 | 第45-46页 |
| 3.1.3 常用缓冲液及溶液 | 第46-47页 |
| 3.1.4 抗体 | 第47-48页 |
| 3.1.5 朊病毒毒株、细胞株及细胞株菌株 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.2.1 脑组织匀浆的制备 | 第48页 |
| 3.2.2 细胞的复苏传代和冻存 | 第48-49页 |
| 3.2.3 原代小鼠皮质神经元的细胞培养 | 第49页 |
| 3.2.4 SMB感染性细胞系的培养 | 第49页 |
| 3.2.5 朊病毒类似肽 | 第49-50页 |
| 3.2.6 细胞瞬时转染 | 第50页 |
| 3.2.7 免疫印迹 | 第50-51页 |
| 3.2.8 组织免疫化学染色 | 第51-52页 |
| 3.2.9 组织和细胞免疫荧光染色 | 第52-53页 |
| 3.2.10 统计学处理 | 第53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-68页 |
| 3.3.1 朊病毒病终末期仓鼠脑组织匀浆中PLKs的表达变化 | 第53-56页 |
| 3.3.2 朊病毒病终末期仓鼠脑组织切片中PLKs的表达变化 | 第56-59页 |
| 3.3.3 PLK1和PLK3信号在脑组织中的定位与分布 | 第59-61页 |
| 3.3.4 PLK1和PLK3在朊病毒感染细胞系中的变化 | 第61-62页 |
| 3.3.5 朊病毒病仓鼠脑组织中PLKs信号通路与细胞周期的变化 | 第62-66页 |
| 3.3.6 PrP106-126肽处理后小鼠原代皮质神经元PLKs和细胞周期的改变 | 第66-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-72页 |
| 第四章 PLK3介导对异常朊蛋白的降解作用 | 第72-102页 |
| 4.1 实验仪器和材料 | 第73-75页 |
| 4.1.1 主要化学试剂,试剂盒 | 第73页 |
| 4.1.2 抗体 | 第73-74页 |
| 4.1.3 质粒载体和蛋白 | 第74页 |
| 4.1.4 PLK3 RNAi序列 | 第74-75页 |
| 4.2 实验方法 | 第75-80页 |
| 4.2.1 RNAi序列的瞬时转染 | 第75页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀实验 | 第75页 |
| 4.2.3 构建真核质粒 | 第75-76页 |
| 4.2.4 质粒的转化、提取和鉴定 | 第76-78页 |
| 4.2.5 GST-PLK3原核蛋白的表达和纯化 | 第78-79页 |
| 4.2.6 GST pull-down | 第79页 |
| 4.2.7 细胞膜蛋白和胞浆蛋白的组分提取 | 第79-80页 |
| 4.2.8 蛋白酶K抗性的检测 | 第80页 |
| 4.3 实验结果 | 第80-98页 |
| 4.3.1 PLK3与PrP蛋白在体外的相互作用 | 第80页 |
| 4.3.2 正常仓鼠和263K仓鼠脑匀浆中PrP和PLKs形成复合物 | 第80-82页 |
| 4.3.3 PLK3的PBD和KD区与PrP的相互作用 | 第82-87页 |
| 4.3.4 过表达正常和突变PrP蛋白对内源性PLK3表达水平的影响 | 第87-89页 |
| 4.3.5 过表达PLK3对PrPs表达的影响 | 第89-91页 |
| 4.3.6 PLK3清除异常PrP依赖于KD区 | 第91-93页 |
| 4.3.7 RNAi沉默PLK3蛋白对PrPs表达的影响 | 第93-94页 |
| 4.3.8 在SMB-S15细胞中过表达PLK3对Prp~(SC)聚集的影响 | 第94-96页 |
| 4.3.9 PLK3通过溶酶体途径降解异常PrP | 第96-98页 |
| 4.4 讨论 | 第98-102页 |
| 第五章 结论及展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-114页 |
| 综述 | 第114-124页 |
| 参考文献 | 第120-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第126-127页 |
