| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩写词对照表 | 第11-13页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 引言 | 第16-23页 |
| 第一部分 基于CRISPR/CAS9系统的CAVEOLIN-1在非酒精性脂肪性肝病脂质贮积中的机制研究 | 第23-67页 |
| 前言 | 第23-27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-33页 |
| 1.1 实验对象 | 第27页 |
| 1.2 实验材料 | 第27-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-57页 |
| 2.1 NAFLD小鼠模型的建立 | 第33页 |
| 2.2 NAFLD细胞模型的建立 | 第33页 |
| 2.3 CAVEOLIN-1表达干预动物模型的建立 | 第33-56页 |
| 2.4 统计学方法 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-64页 |
| 3.1 建立NAFLD小鼠模型 | 第57-58页 |
| 3.2 NALFD小鼠与细胞模型中CAVEOLIN-1的表达变化 | 第58-59页 |
| 3.3 肝脏特异性CAVEOLIN-1敲除NAFLD小鼠模型的建立 | 第59-60页 |
| 3.4 CAVEOLIN-1敲除细胞株的建立 | 第60-61页 |
| 3.5 CAVEOLIN-1过表达细胞株的建立 | 第61页 |
| 3.6 CAVEOLIN-1表达干预对细胞脂肪变性的影响 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 第二部分 基于CRISPR/CAS9系统的非酒精性脂肪性肝病脂质贮积相关泛素连接酶的筛选 | 第67-83页 |
| 前言 | 第67-70页 |
| 1 材料与方法 | 第70-71页 |
| 1.1 实验对象 | 第70页 |
| 1.2 实验材料 | 第70-71页 |
| 2 实验方法 | 第71-78页 |
| 2.1 靶向人E3连接酶的sgRNA慢病毒库的构建 | 第71-72页 |
| 2.2 稳定表达人E3连接酶sgRNA细胞库的构建 | 第72-73页 |
| 2.3 人E3连接酶敲除细胞库的构建 | 第73页 |
| 2.4 人E3连接酶敲除细胞库NAFLD细胞模型的构建 | 第73页 |
| 2.5 人E3连接酶脂质荧光报告系统的构建 | 第73-74页 |
| 2.6 基于流式技术的功能E3连接酶筛选 | 第74-75页 |
| 2.7 功能E3连接酶敲除细胞的培养 | 第75页 |
| 2.8 功能E3连接酶sgRNA的提取与鉴定 | 第75-78页 |
| 3 结果 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 综述 | 第83-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 | 第105-115页 |
| 附录1. 载体与质粒图谱 | 第105-111页 |
| 1 pENTRY-U6-U6-EF1α-Cas9-D10A | 第105页 |
| 2 pENTRY-U6-U6-gRNA2-EF1α-Cas9-D10A | 第105-106页 |
| 3 pENTRY-U6-gRNA1-U6-gRNA2-EF1α-Cas9-D10A | 第106页 |
| 4 pENTC-C-MCS-CcdB-Flag-HA-tag | 第106-107页 |
| 5 pENTC-Caveolin-l-F!ag-HA-tag | 第107页 |
| 6 pHAGE-EF1α-Caveolin-1-Flag-HA-GAW-IRES-Puro | 第107-108页 |
| 7 pAd-U6-U6-EF1α-Cas9-D10A | 第108页 |
| 8 pAd/PL-DEST | 第108-109页 |
| 9 pMD2.G | 第109页 |
| 10. psPAX2 | 第109-110页 |
| 11 pLKO.1-gRNA3 | 第110-111页 |
| 附录2. 测序结果图谱 | 第111-115页 |
| 1 pENTRY-U6-gRNA3-U6-gRNA4-EF1α-Cas9-D10A | 第111-112页 |
| 2 pENTRY-U6-gRNA7-U6-gRNA8-EF1α-Cas9-D10A | 第112-113页 |
| 3 pENTC-Caveoln-1-Flag-HA-tag | 第113-114页 |
| 4 pHAGE-EF1α-Caveolin-1-Flag-HA-GAW-IRES-Puro | 第114-115页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第115页 |
