| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| ·自然界中存在的乙醇代谢途径 | 第9-10页 |
| ·嗜热乙醇杆菌作为燃料乙醇生产菌株的优势 | 第10-13页 |
| ·燃料乙醇生产菌的要求 | 第10-11页 |
| ·目前燃料乙醇的生产工程菌简介 | 第11-12页 |
| ·嗜热乙醇杆菌的简介 | 第12-13页 |
| ·嗜热乙醇杆菌中乙醇代谢途径的研究现状 | 第13-15页 |
| 第二章 用于嗜热乙醇杆菌转化质粒的构建 | 第15-32页 |
| ·材料与方法 | 第15-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·培养基与溶液 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| ·基因操作 | 第16页 |
| ·DNA引物合成和DNA测序服务 | 第16页 |
| ·大肠杆菌质粒pTE-24的构建 | 第16-17页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌整合质粒pTE-I_2的构建 | 第17-21页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌质粒pTE-Ori的构建 | 第21-23页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌质粒pTE-adhE的构建 | 第23-25页 |
| ·结果 | 第25-30页 |
| ·大肠杆菌质粒pTE-24的构建 | 第25-26页 |
| ·T.ethanolicus JW200基因组的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒pTE-I_2-down的构建 | 第27-28页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌JJW200整合质粒pTE-I_2的构建 | 第28页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌质粒pTE-Ori的构建 | 第28-29页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌质粒pTE-adhE的构建 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 用大引物突变法对革兰氏阳性菌来源的复制子进行定向进化 | 第32-43页 |
| ·材料与方法 | 第32-37页 |
| ·菌种和质粒 | 第33页 |
| ·培养基与溶液 | 第33-34页 |
| ·主要试剂以及来源 | 第34页 |
| ·主要仪器设备以及来源 | 第34页 |
| ·大引物的制备方法 | 第34-35页 |
| ·极耐热性Tma DNA连接酶的生产和纯化 | 第35-36页 |
| ·由质粒pTE-24和热稳定性DNA连接酶组成的易错PCR | 第36-37页 |
| ·转化子和转化子分析 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·进行大引物随机突变所需的大引物的制备 | 第37-38页 |
| ·由质粒pTE-24和极耐热性Tma DNA连接酶组成的大引物随机突变 | 第38-39页 |
| ·由质粒pTE-24和热稳定性DNA连接酶组成的易错PCR结果 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 嗜热厌氧乙醇杆菌的转化 | 第43-58页 |
| ·材料与方法 | 第45-52页 |
| ·菌株与质粒 | 第45页 |
| ·培养基与培养技术 | 第45-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌的电转化 | 第49-51页 |
| ·转化子的验证与确定 | 第51页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌JW200的超声转化 | 第51-52页 |
| ·经过超声转化后的嗜热厌氧乙醇杆菌的乙醇产量的检测 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-55页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌的电转化 | 第52-54页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌的超声转化 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第五章 来源于嗜热厌氧乙醇杆菌JW200的未知DNA结合蛋白TETH11的初步研究 | 第58-69页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·菌种与质粒 | 第58页 |
| ·培养基与溶液 | 第58页 |
| ·主要试剂及来源 | 第58-59页 |
| ·主要仪器及来源 | 第59页 |
| ·DNA引物合成和DNA测序服务 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-63页 |
| ·Teth11基因的测序 | 第59-60页 |
| ·同源性和保守性分析 | 第60页 |
| ·Teth11的保守序列的突变 | 第60-61页 |
| ·突变后蛋白的表达 | 第61页 |
| ·突变后蛋白的纯化 | 第61-62页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第62页 |
| ·电泳迁移率变动实验 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-67页 |
| ·Teth11的测序 | 第63-65页 |
| ·Teth11的保守序列的突变 | 第65页 |
| ·突变后蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| ·保守位点突变对蛋白与DNA结合的影响 | 第66-67页 |
| ·Teth11在转录中的作用 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第六章 全文总结 | 第69-70页 |
| 论文后记 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第77页 |
