| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-25页 |
| 1 重金属污染的危害 | 第15-16页 |
| 2 植物对重金属胁迫响应机制 | 第16-19页 |
| ·植物对镉的螯合作用 | 第16-18页 |
| ·植物络合素及结构 | 第16-17页 |
| ·植物络合素合酶(phytochelatin synthase,PCS) | 第17页 |
| ·植物络合素在植物对重金属抗性中的作用 | 第17-18页 |
| ·金属硫蛋白及在重金属结合中作用 | 第18-19页 |
| 3 植物Cd吸收转运分子机制 | 第19-23页 |
| ·金属离子转运体ZIP蛋白(ZRT/IRT-like protein)家族 | 第20-21页 |
| ·ZIP蛋白家族的结构特征 | 第20-21页 |
| ·ZIP蛋白基因的表达特性 | 第21页 |
| ·金属离子转运体CDF蛋白家族 | 第21-22页 |
| ·CDF蛋自家族的结构特征 | 第21-22页 |
| ·CDF蛋白基因的表达特性 | 第22页 |
| ·金属离子转运体CAX蛋白家族 | 第22-23页 |
| ·CAX蛋白家族的结构特征 | 第22-23页 |
| ·CAX蛋白基因的表达特性 | 第23页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二部分 研究报告 | 第25-89页 |
| 第一章 萝卜RsPCS基因克隆与表达分析 | 第25-41页 |
| 1 材料和方法 | 第26-31页 |
| ·植物材料和胁迫处理 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·所需试剂 | 第26页 |
| ·萝卜基因组DNA与总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·反转录cDNA第一条链的合成 | 第27页 |
| ·引物设计与合成 | 第27页 |
| ·萝卜PCS基因基因组DNA及cDNA特异扩增 | 第27-28页 |
| ·PCS基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·目的片段的回收 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| ·序列测定及分析 | 第30页 |
| ·萝卜镉处理植株GSH和NPT含量的测定 | 第30-31页 |
| ·RsPCS基因表达研究 | 第31页 |
| ·RsPCS基因实时荧光定量表达研究 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-38页 |
| ·萝卜PCS基因的DNA与cDNA扩增 | 第31-32页 |
| ·萝卜PCS基因的DNA与cDNA克隆及序列分析 | 第32-35页 |
| ·RsPCS氨基酸序列同源性及系统树分析 | 第35-36页 |
| ·萝卜镉处理植株PCs含量的变化 | 第36页 |
| ·萝卜RsPCS基因的表达分析 | 第36-38页 |
| 3 讨论 | 第38-41页 |
| ·RsPCS序列特征 | 第38页 |
| ·Cd胁迫对萝卜中PCs和GSH含量的影响 | 第38页 |
| ·Cd胁迫下PCS基因的表达特性 | 第38-39页 |
| ·Cd胁迫下PSC基因的相对表达量与PCs含量的关系 | 第39-41页 |
| 第二章 萝卜金属硫蛋白Ⅱ基因克隆与表达分析 | 第41-49页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·试验材料和胁迫处理 | 第41-42页 |
| ·萝卜MT2基因EST序列搜索 | 第42页 |
| ·萝卜叶片基因组DNA的提取 | 第42页 |
| ·萝卜叶片总RNA的提取及反转录 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·MT2基因DNA全长克隆、测序 | 第42页 |
| ·MT2基因生物信息学分析 | 第42页 |
| ·RsMT2的表达分析研究 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-46页 |
| ·萝卜EST拼接 | 第43页 |
| ·萝卜叶片总RNA的提取 | 第43页 |
| ·萝卜MT2基因的扩增电泳结果 | 第43页 |
| ·萝卜MT2基因的核苷酸序列分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白一级结构特征及理化性质分析 | 第44-45页 |
| ·蛋白质家族预测及蛋白质亚细胞定位 | 第45-46页 |
| ·萝卜金属硫蛋白的二级结构预测 | 第46页 |
| ·萝卜MT2基因表达分析 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| ·MT基因的诱导表达特性 | 第46-47页 |
| ·MT基因的组织表达特性 | 第47-49页 |
| 第三章 萝卜IRT1基因克隆与表达分析 | 第49-59页 |
| 1 材料与方法 | 第50-51页 |
| ·试验材料和胁迫处理 | 第50页 |
| ·总DNA和RNA提取及cDNA合成 | 第50页 |
| ·引物设计与合成 | 第50页 |
| ·萝卜IRT1基因全长克隆及测序 | 第50-51页 |
| ·IRT1基因的表达分析 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-57页 |
| ·萝卜EST拼接 | 第51页 |
| ·萝卜RsIRT1基因DNA克隆及分析 | 第51-53页 |
| ·萝卜与其他植物铁转运蛋白序列的多重比对 | 第53-54页 |
| ·萝卜与其他植物铁转运蛋白氨基酸序列的系统发生分析 | 第54页 |
| ·推测的萝卜铁转运蛋白RsIRT1的蛋白特征 | 第54-56页 |
| ·萝卜铁转运蛋白RsIRT1的跨膜结构分析 | 第54-55页 |
| ·萝卜铁转运蛋白IRT1的二级结构预测 | 第55页 |
| ·萝卜铁转运蛋白IRT1的信号肽预测 | 第55-56页 |
| ·萝卜铁转运蛋白IRT1的亚细胞定位 | 第56页 |
| ·萝卜RsIRT1基因的表达特性分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 萝卜Ca~(2+)/H~+反向转运体基因CAXl和CAX2克隆与表达特性分析 | 第59-69页 |
| 1 材料方法 | 第60-61页 |
| ·试验材料和胁迫处理 | 第60页 |
| ·研究方法 | 第60-61页 |
| ·萝卜叶片基因组DNA的提取 | 第60页 |
| ·萝卜叶片总RNA的提取及反转录 | 第60页 |
| ·引物设计 | 第60-61页 |
| 2 | 第61-66页 |
| ·萝卜与拟南芥和水稻CAX家族成员的蛋白序列同源性分析 | 第62页 |
| ·萝卜CAX亲水性分析及跨膜区预测 | 第62-65页 |
| ·萝卜CAX基因表达分析 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-69页 |
| 第五章 萝卜金属离子转运体基因RsMTP1克隆与表达特性分析 | 第69-77页 |
| 1 材料方法 | 第70-71页 |
| ·试验材料和胁迫处理 | 第70页 |
| ·研究方法 | 第70页 |
| ·萝卜叶片基因组DNA的提取 | 第70页 |
| ·萝卜叶片总RNA提取与反转录 | 第70页 |
| ·引物设计 | 第70页 |
| ·萝卜MTP1基因全长克隆及测序 | 第70页 |
| ·MTP1基因的表达分析 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-76页 |
| ·萝卜MTP1的克隆及序列分析 | 第71-72页 |
| ·萝卜RsMTP1与其他植物CDF家族基因的氨基酸序列比对 | 第72-74页 |
| ·萝卜MTP1蛋白序列的结构分析 | 第74-75页 |
| ·RsMTP1的表达模式 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| ·CDF家族的结构特征 | 第76页 |
| ·Cd胁迫对MTP1基因表达影响 | 第76-77页 |
| 第六章 利用DDRT技术分离萝卜镉胁迫相关基因 | 第77-89页 |
| 1 材料和方法 | 第78-80页 |
| ·植物材料和胁迫处理 | 第78页 |
| ·总RNA的提取 | 第78页 |
| ·cDNA第一条链的合成和DDRT-PCR | 第78页 |
| ·PCR产物的聚丙烯酰胺电泳展示 | 第78-79页 |
| ·差异cDNA的二次扩增与克隆、测序 | 第79页 |
| ·差异片段的RT-PCR表达分析 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-86页 |
| ·萝卜总RNA的提取 | 第80页 |
| ·萝卜镉响应mRNA差异显示分析 | 第80页 |
| ·差异表达基因片段的再扩增 | 第80-82页 |
| ·萝卜Cd响应基因片段的DDRT分析 | 第82-84页 |
| ·响应镉胁迫的差异表达基因片段的功能分类 | 第84-85页 |
| ·差异片段的RT-PCR表达分析 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-89页 |
| ·mRNA差异显示技术的优缺点 | 第86页 |
| ·差异表达片段在Cd胁迫下的功能 | 第86-89页 |
| 全文结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 发表论文情况 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
