| 导师评阅表 | 第3-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 抗菌肽的来源及分类 | 第16-21页 |
| 1.1 天然抗菌肽 | 第17-19页 |
| 1.1.1 微生物抗菌肽 | 第17页 |
| 1.1.2 真菌抗菌肽 | 第17页 |
| 1.1.3 植物抗菌肽 | 第17页 |
| 1.1.4 动物抗菌肽 | 第17-19页 |
| 1.2 化学合成抗菌肽 | 第19页 |
| 1.3 基因工程抗菌肽 | 第19-20页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统抗菌肽 | 第19页 |
| 1.3.2 酵母表达系统抗菌肽 | 第19-20页 |
| 1.3.3 枯草芽胞杆菌表达系统抗菌肽 | 第20页 |
| 1.3.4 昆虫表达系统抗菌肽 | 第20页 |
| 1.4 酶解法抗菌肽 | 第20页 |
| 1.5 根据抗菌肽的结构分类 | 第20-21页 |
| 1.5.1 α-螺旋结构抗菌肽 | 第20页 |
| 1.5.2 β折叠结构抗菌肽 | 第20-21页 |
| 1.5.3 无规则卷曲结构多肽 | 第21页 |
| 1.5.4 Loop 环状结构抗菌肽 | 第21页 |
| 2 抗菌肽的生物学功能及应用 | 第21-23页 |
| 2.1 抗细菌活性 | 第21页 |
| 2.2 抗真菌活性 | 第21-22页 |
| 2.3 抗病毒活性 | 第22页 |
| 2.4 抗肿瘤活性 | 第22页 |
| 2.5 抗原虫活性 | 第22页 |
| 2.6 免疫调节作用 | 第22页 |
| 2.7 促进伤口愈合作用 | 第22-23页 |
| 3 抗菌肽的抑菌机制及活性结构 | 第23-26页 |
| 3.1 抗菌肽的抑菌机制 | 第23-25页 |
| 3.1.1 细胞膜损伤机制 | 第23-24页 |
| 3.1.2 细胞内损伤机制 | 第24-25页 |
| 3.2 抗菌肽的活性结构 | 第25-26页 |
| 3.2.1 抗菌肽的一级结构 | 第25页 |
| 3.2.2 抗菌肽的α-螺旋结构 | 第25页 |
| 3.2.3 抗菌肽的疏水性 | 第25页 |
| 3.2.4 抗菌肽的两亲性 | 第25-26页 |
| 3.2.5 抗菌肽的净电荷 | 第26页 |
| 4 衍生抗菌肽分子的设计 | 第26-27页 |
| 4.1 衍生抗菌肽分子的设计方法 | 第26-27页 |
| 4.1.1 氨基酸序列修饰法 | 第26页 |
| 4.1.2 活性结构优化法 | 第26页 |
| 4.1.3 杂合抗菌肽法 | 第26-27页 |
| 5 大肠杆菌表达系统 | 第27-29页 |
| 5.1 大肠杆菌表达系统的构成 | 第27页 |
| 5.1.1 目的基因 | 第27页 |
| 5.1.2 表达载体 | 第27页 |
| 5.1.3 表达宿主菌 | 第27页 |
| 5.2 大肠杆菌表达系统的影响因素 | 第27-28页 |
| 5.2.1 表达载体的种类 | 第27-28页 |
| 5.2.2 目的基因的密码子 | 第28页 |
| 5.2.3 mRNA 的稳定性 | 第28页 |
| 5.2.4 诱导、培养条件 | 第28页 |
| 5.3 pET 表达系统 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 第二章 实验部分 | 第36-68页 |
| 实验一 绵羊 NK-Lysin 在大肠杆菌中的表达分析 | 第36-49页 |
| 摘要 | 第36-37页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| 1.1 材料 | 第37页 |
| 1.1.1 菌株与载体 | 第37页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 1.1.3 仪器 | 第37页 |
| 1.2 方法 | 第37-42页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第37-38页 |
| 1.2.2 NK-Lysin-X 目的基因 PCR 扩增 | 第38页 |
| 1.2.3 NK-Lysin-X 的 PCR 产物回收 | 第38页 |
| 1.2.4 NK-Lysin-X 克隆载体的构建 | 第38-39页 |
| 1.2.5 NK-Lysin-X 克隆载体的转化 | 第39-40页 |
| 1.2.6 NK-Lysin-X 克隆载体鉴定 | 第40页 |
| 1.2.7 NK-Lysin-X 原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 1.2.8 NK-Lysin-X 原核表达载体的鉴定 | 第41页 |
| 1.2.9 NK-Lysin-X 在 DE3 中的诱导表达 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-47页 |
| 2.1 NK-Lysin-X 目的基因 PCR 扩增 | 第42页 |
| 2.2 NK-Lysin-X 克隆载体菌液 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3 NK-Lysin-X 克隆载体双酶切鉴定 | 第43页 |
| 2.4 表达载体的双酶切 | 第43-44页 |
| 2.5 NK-Lysin-X 原核表达载体的菌液 PCR 鉴定 | 第44-46页 |
| 2.6 NK-Lysin-X 原核表达载体双酶切 | 第46页 |
| 2.7 NK-Lysin-X 诱导表达的 SDS-PAGE 检测 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 实验二 绵羊抗菌肽 NK-Lysin 功能区的设计合成及其生物学功能研究 | 第49-59页 |
| 摘要 | 第49-50页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 1.1 材料 | 第50页 |
| 1.1.1 抗菌肽 | 第50页 |
| 1.1.2 菌株与细胞系 | 第50页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第50页 |
| 1.1.4 仪器 | 第50页 |
| 1.2 方法 | 第50-52页 |
| 1.2.1 抗菌肽序列的选择和结构分析预测 | 第50-51页 |
| 1.2.2 固体培养基径向扩散实验 | 第51页 |
| 1.2.3 最小抑菌浓度测定 | 第51页 |
| 1.2.4 合成多肽的抗肿瘤细胞活性 | 第51-52页 |
| 2 结果 | 第52-56页 |
| 2.0 合成多肽的序列及二级结构 | 第52-54页 |
| 2.1 多肽的抑菌效果 | 第54-55页 |
| 2.2 微量肉汤稀释法的 MIC 测定结果 | 第55页 |
| 2.3 多肽对肿瘤细胞的杀伤作用 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 实验三 合成绵羊抗菌肽 NK559777-18、NK7652-23 对雏鸡沙门氏菌感染的治疗研究 | 第59-68页 |
| 摘要 | 第59-60页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 1.1 材料 | 第60页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 1.2 方法 | 第60-62页 |
| 1.2.1 沙门氏菌的准备 | 第60页 |
| 1.2.2 吸光度标准曲线的建立 | 第60页 |
| 1.2.3 雏鸡沙门氏菌感染 | 第60-61页 |
| 1.2.4 感染雏鸡的多肽治疗 | 第61页 |
| 1.2.5 雏鸡沙门氏菌感染的病理学观察 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-66页 |
| 2.1 沙门氏菌数量与其吸光度标准曲线 | 第62页 |
| 2.2 雏鸡感染沙门氏菌的临床症状 | 第62-63页 |
| 2.3 多肽对雏鸡沙门氏菌攻毒的治疗效果 | 第63页 |
| 2.4 雏鸡沙门氏菌感染后各器官的病理变化 | 第63-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 全文总结 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
