| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 甘蔗宿根矮化病的发生及传播 | 第11-12页 |
| 1.2 甘蔗宿根矮化病的分离及培养 | 第12页 |
| 1.3 甘蔗宿根矮化病的检测 | 第12-15页 |
| 1.4 基因组学研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 基因测序工程 | 第15页 |
| 1.4.2 基因的退化与缺失 | 第15-16页 |
| 1.4.3 基因组中致病相关基因 | 第16页 |
| 1.4.4 基因的同源性比较 | 第16-17页 |
| 1.4.5 对寄主适应性 | 第17页 |
| 1.5 σ因子和抗σ因子研究进展 | 第17-20页 |
| 1.6 本研究的目的、意义和技术路线 | 第20-22页 |
| 1.6.1 本研究的目的、意义 | 第20-21页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 Lxx18460基因的纯化及PCR检测 | 第22-32页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 菌液材料 | 第22页 |
| 2.1.2 酶、试剂和检测设备 | 第22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 Lxx18460基因的PCR检测 | 第22-23页 |
| 2.2.2 Lxx18460基因的诱导表达和纯化 | 第23-25页 |
| 2.2.3 纯化蛋白的分析及质量检测 | 第25-26页 |
| 2.2.4 纯化蛋白的透析与浓缩 | 第26-27页 |
| 2.2.5 蛋白质银染 | 第27页 |
| 2.3 结果分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 样品的PCR检测结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 Lxx18460基因诱导表达蛋白的纯化结果 | 第28-30页 |
| 2.3.3 Lxx18460基因编码蛋白的透析和浓缩结果 | 第30页 |
| 2.4 小结 | 第30-32页 |
| 3 Lxx18460基因单克隆抗体的制备和检测 | 第32-46页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 植物材料及处理 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-37页 |
| 3.2.1 抗血清的制备 | 第32页 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞的培养血清的效价测定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 杂交瘤细胞的培养血清的Western blot检测 | 第33-34页 |
| 3.2.4 杂交瘤阳性克隆的筛选 | 第34页 |
| 3.2.5 细菌总蛋白的SDS-PAGE鉴定和Western blot检测 | 第34页 |
| 3.2.6 感病和健康甘蔗茎、叶的DNA提取及PCR检测 | 第34-36页 |
| 3.2.7 感病和健康甘蔗茎、叶总蛋白的提取及SDS-PAGE鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.8 感病和健康甘蔗茎、叶的Western blot检测 | 第37页 |
| 3.3 结果分析 | 第37-45页 |
| 3.3.1 杂交瘤细胞培养血清的间接ELISA测定结果 | 第37-38页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞的培养血清的Western blot检测结果 | 第38页 |
| 3.3.3 杂交瘤阳性克隆的筛选结果 | 第38-40页 |
| 3.3.4 4B3A2单克隆抗体的Western blot检测结果 | 第40页 |
| 3.3.5 细菌总蛋白的SDS-PAGE鉴定和Western blot检测 | 第40-43页 |
| 3.3.6 感病和健康甘蔗茎、叶的PCR检测 | 第43-44页 |
| 3.3.7 感病和健康甘蔗茎、叶总蛋白及细菌总蛋白的SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| 3.3.8 感病和健感病和健康甘蔗茎、叶总蛋白的Western blot检测 | 第45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 4 Lxx18460基因转化烟草的研究 | 第46-64页 |
| 4.1 材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 4.1.2 菌种及载体 | 第46页 |
| 4.1.3 实验器材和试剂 | 第46页 |
| 4.1.4 培养基 | 第46-47页 |
| 4.2 方法 | 第47-54页 |
| 4.2.1 植物表达载体引物的设计 | 第47页 |
| 4.2.2 Lxx18460基因ORF的扩增及目的片段的回收 | 第47-48页 |
| 4.2.3 pBI121质粒的提取 | 第48-49页 |
| 4.2.4 双酶切及目的片段的回收 | 第49-50页 |
| 4.2.5 EHA105农杆菌感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| 4.2.6 目的片段与载体的连接及转化 | 第51页 |
| 4.2.7 重组质粒的提取及酶切验证 | 第51页 |
| 4.2.8 烟草无菌苗制备及农杆菌介导叶盘法转化烟草 | 第51-52页 |
| 4.2.9 转基因烟草DNA的提取 | 第52-53页 |
| 4.2.10 转基因烟草的PCR检测 | 第53页 |
| 4.2.11 转基因烟草表型的观察 | 第53-54页 |
| 4.3 结果和分析 | 第54-62页 |
| 4.3.1 植物表达载体的构建及检测 | 第54-58页 |
| 4.3.2 转基因烟草的获得 | 第58-60页 |
| 4.3.3 转基因烟草的检测 | 第60-62页 |
| 4.3.4 转基因烟草表型的观察 | 第62页 |
| 4.4 小结 | 第62-64页 |
| 5 讨论与结论 | 第64-67页 |
| 5.1 全文讨论 | 第64-65页 |
| 5.1.1 Lxx18460基因膜蛋白的纯化 | 第64页 |
| 5.1.2 Lxx18460基因膜蛋白单克隆抗体的制备和检测 | 第64-65页 |
| 5.1.3 Lxx18460基因转烟草的研究 | 第65页 |
| 5.2 全文结论 | 第65-67页 |
| 5.3 论文创新点 | 第67页 |
| 展望 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
