| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 鱼类免疫研究 | 第14-15页 |
| 1.2 IFN与免疫 | 第15-22页 |
| 1.2.1 鱼类Ⅰ型干扰素 | 第15-19页 |
| 1.2.2 鱼类Ⅱ型 | 第19-22页 |
| 1.3 多倍体鱼细胞系 | 第22-24页 |
| 第二章 三倍体鱼干扰素的克隆及功能的初步研究 | 第24-51页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 三倍体鱼干扰素 3nIFNa编码阅读框部分的克隆 | 第25-31页 |
| 2.2.1 引物设计及合成 | 第25-26页 |
| 2.2.2 SVCV病毒处理三倍体鱼尾鳍成纤维细胞系 | 第26页 |
| 2.2.3 用Trizol法提取三倍体鱼总RNA | 第26-27页 |
| 2.2.4 cDNA第一条链的合成 | 第27页 |
| 2.2.5 β-actin检测 | 第27-28页 |
| 2.2.6 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第29页 |
| 2.2.8 PCR产物末端加A尾 | 第29页 |
| 2.2.9 PCR产物的回收 | 第29页 |
| 2.2.10 连接反应 | 第29-30页 |
| 2.2.11 采用热激法转化大肠杆菌TOP10感受态 | 第30页 |
| 2.2.12 阳性克隆的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.13 测序鉴定 | 第31页 |
| 2.3 三倍体鱼IFNa基因cDNA全长的扩增 | 第31-37页 |
| 2.3.1 引物设计及合成 | 第31-32页 |
| 2.3.2 用Trizol法提取三倍体鱼干扰素RNA（见 2.2.3） | 第32页 |
| 2.3.3 三倍体鱼IFN 5’-RACE和 3’-RACE cDNA的制备 | 第32页 |
| 2.3.4 5’RACE的PCR扩增 | 第32-34页 |
| 2.3.5 3’RACE PCR扩增 | 第34-36页 |
| 2.3.6 三倍体鱼IFNa开放阅读框（ORF）全长的扩增 | 第36-37页 |
| 2.4 三倍体鱼干扰素 3nIFNb cDNA编码阅读框部分的克隆 | 第37-38页 |
| 2.4.1 引物设计及合成 | 第37页 |
| 2.4.2 PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.4.3 PCR产物末端加A尾 | 第38页 |
| 2.4.4 胶回收 | 第38页 |
| 2.4.5 连接 | 第38页 |
| 2.4.6 转化 | 第38页 |
| 2.4.7 阳性克隆的筛选，保种及测序鉴定 | 第38页 |
| 2.5 三倍体鱼IFNb基因cDNA全长的扩增 | 第38-45页 |
| 2.5.1 引物设计及合成 | 第38页 |
| 2.5.2 5’RACE的PCR扩增 | 第38-40页 |
| 2.5.3 3’RACE PCR扩增 | 第40-42页 |
| 2.5.4 三倍体鱼IFNb ORF全长的扩增 | 第42-45页 |
| 2.6 实验结果 | 第45-50页 |
| 2.6.1 总RNA提取结果 | 第45页 |
| 2.6.2 三倍体鱼IFNa和IFNb基因cDNA序列信息 | 第45-50页 |
| 2.7 讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 三倍体鱼IFN基因的表达 | 第51-69页 |
| 3.1 材料 | 第51-53页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 3.1.2 仪器与试剂 | 第51-53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-63页 |
| 3.2.1 三倍体鱼IFNa和IFNb表达载体的构建 | 第53-59页 |
| 3.2.2 三倍体鱼IFNa和IFNb蛋白质免疫印迹检测（western blotting） | 第59-62页 |
| 3.2.3 三倍体鱼IFNa和IFNb蛋白糖基化的确定 | 第62-63页 |
| 3.3 实验结果 | 第63-67页 |
| 3.3.1 三倍体鱼IFNa和IFNb表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 3.3.2 三倍体鱼IFNa和IFNb表达载体在 293T中的表达 | 第64-65页 |
| 3.3.3 三倍体鱼IFNa和IFNb蛋白糖基化的确定 | 第65-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
