| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 芍药概述 | 第14页 |
| 1.2 种子休眠机理的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 影响种子休眠的因素 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物激素GA对种子休眠解除的调控作用 | 第15页 |
| 1.2.3 植物激素ABA对种子休眠解除的调控作用 | 第15-16页 |
| 1.2.4 其他植物激素对种子休眠解除的调控作用 | 第16-17页 |
| 1.3 ABA在休眠萌发过程中的相关调控基因 | 第17页 |
| 1.4 ABA 8'-羟化酶(CYP707As基因)的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.4.1 ABA8'-羟化酶的作用机理 | 第17-18页 |
| 1.4.2 CYP707As基因(ABA 8'-羟化酶)的表达模式 | 第18-20页 |
| 1.5 植物表达载体构建的研究进展 | 第20页 |
| 1.6 本研究的目的意义与技术路线 | 第20-22页 |
| 1.6.1 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 1.6.2 本研究的技术路线和内容 | 第21-22页 |
| 第二章 PlCYP707A1和PlCYP707A2基因的表达模式分析 | 第22-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.2 试验试剂与仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.1 试验试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 溶液的配制 | 第22页 |
| 2.2.3 试验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 试验方法 | 第23-27页 |
| 2.3.1 种子的沙藏催芽 | 第23页 |
| 2.3.2 芍药种子RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.3 RNA质量的检测 | 第24-25页 |
| 2.3.4 反转录合成cDNA | 第25-26页 |
| 2.3.5 半定量RT-PCR分析 | 第26页 |
| 2.3.6 qRT-PCR分析 | 第26-27页 |
| 2.4 结果与分析 | 第27-29页 |
| 2.4.1 芍药种子总RNA的提取质量 | 第27页 |
| 2.4.2 芍药种子合成的cDNA电泳检测 | 第27-28页 |
| 2.4.3 半定量RT-PCR循环次数的确定 | 第28页 |
| 2.4.4 PlCYP707A1和PlCYP707A2基因的半定量RT-PCR分析 | 第28页 |
| 2.4.5 PlCYP707A1和PlCYP707A2基因的qRT-PCR分析 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-31页 |
| 第三章 PlCYP707A1和PlCP707A2基因的克隆与生物信息学分析 | 第31-51页 |
| 3.1 试验材料 | 第31页 |
| 3.2 试验试剂与仪器 | 第31-32页 |
| 3.2.1 试验试剂 | 第31页 |
| 3.2.2 菌体及载体 | 第31页 |
| 3.2.3 溶液的配制 | 第31页 |
| 3.2.4 试验仪器 | 第31-32页 |
| 3.3 试验方法 | 第32-35页 |
| 3.3.1 PlCYP707A1和PlCYP707A2基因的cDNA扩增 | 第32页 |
| 3.3.2 TA克隆 | 第32-34页 |
| 3.3.3 生物信息学分析工具 | 第34-35页 |
| 3.4 结果与分析 | 第35-50页 |
| 3.4.1 PlCYP707A1基因cDNA全长的扩增产物 | 第35-36页 |
| 3.4.2 PlCYP707A1基因的生物信息学分析 | 第36-42页 |
| 3.4.3 PlCYP707A2基因cDNA全长的扩增产物 | 第42-44页 |
| 3.4.4 PlCYP707A2基因的生物信息学分析 | 第44-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 PlCYP707A1和PlCYP707A2基因的载体构建及转化 | 第51-57页 |
| 4.1 试验材料 | 第51页 |
| 4.2 试验试剂与仪器 | 第51页 |
| 4.2.1 试验试剂 | 第51页 |
| 4.2.2 菌体及载体 | 第51页 |
| 4.2.3 溶液的配制 | 第51页 |
| 4.2.4 试验仪器 | 第51页 |
| 4.3 试验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 重组质粒PGM-T-CYP707As的提取 | 第51-52页 |
| 4.3.2 重组质粒PGM-T-CYP707As的双酶切 | 第52-53页 |
| 4.3.3 载体质粒pBI121的双酶切 | 第53页 |
| 4.3.4 目的基因与载体质粒相连 | 第53页 |
| 4.3.5 植物表达载体转化农杆菌 | 第53-54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-56页 |
| 4.4.1 pBI121-CYP707A1重组载体的菌落PCR鉴定 | 第54页 |
| 4.4.2 pBI121-CYP707A1重组载体的双酶切验证 | 第54-55页 |
| 4.4.3 pBI121-CYP707A2重组载体的菌落PCR鉴定 | 第55页 |
| 4.4.4 pBI121-CYP707A2重组载体的双酶切验证 | 第55-56页 |
| 4.4.5 pBI121-CYP707A1/CYP707A2重组农杆菌菌落PCR鉴定 | 第56页 |
| 4.5 小结 | 第56-57页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第57-61页 |
| 5.1 结论 | 第57页 |
| 5.1.1 明确PlCYP707A1和PlCYP707A2基因在芍药种子萌发过程中的表达模式 | 第57页 |
| 5.1.2 克隆得到芍药PlCYP707A1和PlCYP707A2基因 | 第57页 |
| 5.1.3 构建PlCYP707A1和PlCYP707A2基因的植物表达载体并转化农杆菌 | 第57页 |
| 5.2 讨论 | 第57-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
