| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 一 引言 | 第10-25页 |
| 1.1 模式植物本氏烟草 | 第10-13页 |
| 1.1.1 本氏烟草简介 | 第10页 |
| 1.1.2 本氏烟草易感性的原因 | 第10-11页 |
| 1.1.3 本氏烟草RNAi相关基因 | 第11-13页 |
| 1.2 amiRNA技术 | 第13-20页 |
| 1.2.1 小RNA简介 | 第13页 |
| 1.2.2 小RNA的生物合成和作用方式 | 第13-14页 |
| 1.2.3 siRNA介导的基因沉默的方法 | 第14-15页 |
| 1.2.4 amiRNA的原理特征 | 第15-16页 |
| 1.2.5 amiRNA的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.6 amiRNA的应用 | 第17-19页 |
| 1.2.7 amiRNA的独特应用 | 第19-20页 |
| 1.3 病毒诱导的基因沉默(VIGS) | 第20-24页 |
| 1.3.1 VIGS简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 农杆菌介导法 | 第21页 |
| 1.3.3 VIGS载体的应用 | 第21-22页 |
| 1.3.4 MIR VIGS | 第22-24页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 二 材料与方法 | 第25-34页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株 | 第25-26页 |
| 2.1.3 各种生化试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 实验主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 amiRNA引物的设计 | 第26-27页 |
| 2.2.2 pCVA-amiRNA载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.3 农杆菌转化及侵染实验 | 第28-29页 |
| 2.2.4 Trizon法提取总RNA | 第29-30页 |
| 2.2.5 cDNA的合成 | 第30页 |
| 2.2.6 利用qPCR检测基因表达量 | 第30-31页 |
| 2.2.7 重组病毒载体pCVA-amiRNA与病毒共侵染 | 第31-32页 |
| 2.2.8 pBI121(Kpn Ⅰ)的构建 | 第32页 |
| 2.2.9 pBI121-amiRNA载体构建 | 第32页 |
| 2.2.10 pBI121-amiRNA载体的干扰实验 | 第32-33页 |
| 2.2.11 pBI121-amiRNA载体与病毒共侵染 | 第33-34页 |
| 三 结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.1 pCVA-amiRNA载体的构建 | 第34-37页 |
| 3.2 pCVA-amiRNA载体的侵染及干扰效果分析 | 第37-39页 |
| 3.3 pCVA-amiRNA载体与病毒共侵染实验 | 第39-41页 |
| 3.4 pBI121(Kpn Ⅰ)载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.5 pBI121-amiRNA载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.6 pBI121-amiRNA载体的干扰效果分析 | 第43-45页 |
| 3.7 pBI121-amiRNA载体与病毒共侵染实验 | 第45-46页 |
| 四 讨论与结论 | 第46-48页 |
| 4.1 讨论 | 第46-47页 |
| 4.2 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 附录 | 第54-66页 |
| 附录Ⅰ amiRNA在不同植物中的靶标和表型 | 第54-58页 |
| 附录Ⅱ 常用培养基及试剂的配制 | 第58-61页 |
| 附录Ⅲ 本论文所用引物 | 第61-65页 |
| 附录Ⅳ 载体图谱 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
