| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 mTOR复合物及雷帕霉素 | 第14-17页 |
| 1.1.1 雷帕霉素的发现及作用初探 | 第14页 |
| 1.1.2 mTOR复合物及雷帕霉素的作用 | 第14-16页 |
| 1.1.3 mTOR信号通路 | 第16-17页 |
| 1.2 mTOR与氨基酸代谢 | 第17-19页 |
| 1.2.1 mTOR信号通路在氨基酸代谢中的作用 | 第17-18页 |
| 1.2.2 氨基酸代谢关键酶 | 第18-19页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌侵袭及其细胞壁肽聚糖对乳腺上皮细胞的作用 | 第19-23页 |
| 1.3.1 人乳腺上皮细胞的体外培养及乳蛋白的分泌 | 第19-21页 |
| 1.3.2 病原菌与宿主细胞的相互作用 | 第21页 |
| 1.3.3 金黄色葡萄球菌及其细胞壁肽聚糖 | 第21页 |
| 1.3.4 可能与细胞物质代谢相关的转录因子 | 第21-23页 |
| 1.4 激光扫描共聚焦显微镜技术 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌侵袭人乳腺上皮细胞影响氨基酸代谢关键酶和β-酪蛋白的表达 | 第25-47页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂与耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 MCF-10A细胞的培养 | 第26-27页 |
| 2.2.2 金黄色葡萄球菌侵袭人乳腺上皮细胞条件的优化 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 金黄色葡萄球菌的培养及菌落计数 | 第27页 |
| 2.2.2.2 金黄色葡萄球菌侵袭人乳腺上皮细胞MOI及时间的优化 | 第27-28页 |
| 2.2.3 qPCR检测细菌侵袭细胞中六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白基因表达 | 第28-31页 |
| 2.2.3.1 细胞总RNA的提取及检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 cDNA的合成及qPCR引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 qPCR检测六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白基因的相对表达量 | 第30-31页 |
| 2.2.4 Elisa检测细菌侵袭细胞内外六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白的含量 | 第31-33页 |
| 2.2.5 细胞蛋白提取 | 第33-34页 |
| 2.2.6 Western Blot检测细菌侵袭对mTOR信号通路活性的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.7 数据统计学分析 | 第35页 |
| 2.2.8 激光扫描共聚焦显微镜观察金黄色葡萄球菌侵入人乳腺上皮细胞及对细胞骨架的影响 | 第35-36页 |
| 2.3 结果 | 第36-46页 |
| 2.3.1 金黄色葡萄球菌侵袭人乳腺上皮细胞MCF-10A感染复数MOI的优化 | 第36-37页 |
| 2.3.2 金黄色葡萄球菌侵袭人乳腺上皮细胞MCF-10A最佳侵袭时间的优化 | 第37-38页 |
| 2.3.3 金黄色葡萄球菌侵袭影响细胞内外六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白的表达 | 第38-42页 |
| 2.3.4 激光扫描共聚焦显微镜观察金黄色葡萄球菌侵入细胞并影响细胞骨架的完整性 | 第42-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 肽聚糖处理人乳腺上皮细胞影响氨基酸代谢关键酶和β-酪蛋白的表达 | 第47-55页 |
| 3.1 材料 | 第47页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第47页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 3.2 方法 | 第47-48页 |
| 3.2.1 MCF-10A细胞的培养 | 第47页 |
| 3.2.2 肽聚糖溶液的配制及处理条件 | 第47页 |
| 3.2.3 qPCR检测PGN处理细胞中六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白基因表达 | 第47页 |
| 3.2.4 Elisa检测PGN处理细胞内外六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白含量 | 第47-48页 |
| 3.2.5 Western blot检测PGN处理细胞对mTOR信号通路及相关转录因子活性的影响 | 第48页 |
| 3.2.6 数据统计学分析 | 第48页 |
| 3.3 结果 | 第48-53页 |
| 3.3.1 PGN诱导氨基酸代谢关键酶与β-酪蛋白基因的转录 | 第48-49页 |
| 3.3.2 PGN诱导氨基酸代谢关键酶与β-酪蛋白表达与分泌 | 第49-51页 |
| 3.3.3 PGN诱导mTORC1信号通路和几种转录因子的活性 | 第51-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 mTORC1信号通路调控人乳腺上皮细胞内氨基酸代谢关键酶与β-酪蛋白表达与分泌 | 第55-76页 |
| 4.1 材料 | 第55页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第55页 |
| 4.1.2 菌株 | 第55页 |
| 4.1.3 主要试剂与仪器 | 第55页 |
| 4.2 方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 MCF-10A细胞 | 第55页 |
| 4.2.2 MTT法检测细胞增殖 | 第55-56页 |
| 4.2.3 靶向人Raptor基因shRNA表达质粒的构建与提取 | 第56页 |
| 4.2.4 MCF-10A细胞培养与目标质粒的转染 | 第56-57页 |
| 4.2.5 qPCR检测Raptor基因沉默的效果 | 第57页 |
| 4.2.6 qPCR检测细胞中六种氨基酸代谢关键酶及β-酸蛋白基因表达 | 第57页 |
| 4.2.7 Elisa检测不同处理后细胞内外六种氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白含量 | 第57-58页 |
| 4.2.8 Western Blot检测mTOR信号通路及相关转录因子的活性 | 第58页 |
| 4.2.13 数据统计学分析 | 第58页 |
| 4.3 结果 | 第58-75页 |
| 4.3.1 mTORC1调控人乳腺上皮细胞增殖及氨基酸代谢关键酶和β-酪蛋白的表达与分泌 | 第58-64页 |
| 4.3.1.1 Rapamycin抑制MCF-10A细胞增殖且具有时间依赖性和剂量依赖性 | 第58-59页 |
| 4.3.1.2 Rapamycin抑制MCF-10A细胞氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白基因转录 | 第59-60页 |
| 4.3.1.3 Rapamycin抑制MCF-10A细胞氨基酸代谢关键酶及β-酪蛋白的表达与分泌 | 第60-62页 |
| 4.3.1.4 Rapamycin抑制MCF-10A细胞mTOR信号通路和多种转录因子活性 | 第62-64页 |
| 4.3.2 Raptor基因转录后沉默抑制氨基酸代谢关键酶和β-酪蛋白表达与分泌 | 第64-70页 |
| 4.3.2.1 靶向Raptor基因shRNA表达载体转染MCF-10A显著抑制Raptor基因的表达 | 第64-65页 |
| 4.3.2.2 靶向Raptor基因siRNA抑制MCF-10A细胞氨基酸代谢关键酶及β胞酪蛋白基因转录 | 第65-66页 |
| 4.3.2.3 靶向Raptor基因siRNA抑制MCF-10A细胞氨基酸代谢关键酶及β胞酪蛋白表达与分泌 | 第66-68页 |
| 4.3.2.4 靶向Raptor基因siRNA抑制MCF-10A细胞mTORC1及相关转录因子活性 | 第68-70页 |
| 4.3.3 mTORC1介导金黄色葡萄球菌诱导的氨基酸代谢关键酶和β-酪蛋白的表达 | 第70-75页 |
| 4.3.3.1 细菌侵袭时间不同对MCF-10A细胞mTORC1信号通路活性的影响不同 | 第70-72页 |
| 4.3.3.2 Rapamycin抑制细菌侵袭诱导的MCF-10A细胞六种关键酶及β-酪蛋白基因转录 | 第72-73页 |
| 4.3.3.3 Rapamycin抑制细菌侵袭诱导的MCF-10A细胞六种关键酶及β胞酪蛋白表达和分泌 | 第73-75页 |
| 4.4 讨论 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第87页 |
