| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-51页 |
| 1.1 RNA结合蛋白概述 | 第15页 |
| 1.2 RNA结合蛋白结构域的分类与功能 | 第15-19页 |
| 1.3 植物中RNA结合蛋白研究进展概述 | 第19-27页 |
| 1.3.1 RNA结合蛋白与植物逆境响应 | 第19-22页 |
| 1.3.1.1 富含甘氨酸的RBP与非生物胁迫 | 第19-21页 |
| 1.3.1.2 逆境相关的RNA稳定因子 | 第21-22页 |
| 1.3.2 富含丝氨酸/精氨酸的SR蛋白与植物发育进程 | 第22-24页 |
| 1.3.3 RNA结合蛋白与开花时间调控 | 第24-27页 |
| 1.3.3.1 参与 5′-端加帽RBP与开花时间调控 | 第25页 |
| 1.3.3.2 参与可变剪接的RBP与开花时间调控 | 第25-26页 |
| 1.3.3.3 参与mRNA运输的RBP与开花时间调控 | 第26页 |
| 1.3.3.4 参与microRNA发生的RBP与开花时间调控 | 第26-27页 |
| 1.3.3.5 参与多聚腺苷酸化的RBP与开花时间调控 | 第27页 |
| 1.4 选择性多聚腺苷酸化 | 第27-43页 |
| 1.4.1 选择性多聚腺苷酸化的分类 | 第28-29页 |
| 1.4.2 APA的调控分子机制 | 第29-30页 |
| 1.4.3 多聚腺苷酸化相关的顺式作用元件 | 第30-32页 |
| 1.4.4 多聚腺苷酸化相关的蛋白因子 | 第32-37页 |
| 1.4.4.1 多聚腺苷酸化特定因子CPSF功能概述 | 第32-34页 |
| 1.4.4.2 切割刺激因子CstF功能概述 | 第34-35页 |
| 1.4.4.3 切割因子CFⅠm的概述 | 第35页 |
| 1.4.4.4 切割因子CFⅡm的功能概述 | 第35-36页 |
| 1.4.4.5 poly（A）合成酶PAP的功能概述 | 第36页 |
| 1.4.4.6 poly（A）结合蛋白PABP的功能概述 | 第36-37页 |
| 1.4.4.7 RNAPⅡCTD功能概述 | 第37页 |
| 1.4.5 APA参与的生物学过程 | 第37-39页 |
| 1.4.5.1 APA与发育、细胞分化 | 第37-38页 |
| 1.4.5.2 APA与增殖 | 第38页 |
| 1.4.5.3 APA与神经细胞活化 | 第38页 |
| 1.4.5.4 APA与疾病 | 第38-39页 |
| 1.4.6 植物中APA研究进展 | 第39-43页 |
| 1.4.6.1 植物中的多聚腺苷酸化信号 | 第39-40页 |
| 1.4.6.2 植物中的多聚腺苷酸化效应蛋白 | 第40页 |
| 1.4.6.3 植物中的APA现象 | 第40-43页 |
| 1.5 全基因组水平鉴定RBP的靶RNA序列和APA转换的技术 | 第43-46页 |
| 1.5.1 CLIP技术全基因组水平鉴定RBP的靶RNA序列 | 第43-44页 |
| 1.5.2 PAS-seq全基因组水平鉴定APA事件 | 第44-46页 |
| 1.6 一个新的参与开花调控的RNA结合蛋白 | 第46-49页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第49-51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-81页 |
| 2.1 材料 | 第51-56页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第51页 |
| 2.1.3 常用各种分子生物学试剂与耗材 | 第51-52页 |
| 2.1.4 抗体 | 第52页 |
| 2.1.5 培养基 | 第52-53页 |
| 2.1.6 质粒与引物及文库序列 | 第53-56页 |
| 2.2 实验方法 | 第56-81页 |
| 2.2.1 序列扩增与质粒构建 | 第56-58页 |
| 2.2.1.1 序列扩增 | 第56页 |
| 2.2.1.2 质粒构建 | 第56-58页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态制备 | 第58-59页 |
| 2.2.3 植物培养 | 第59页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的植物转基因 | 第59-60页 |
| 2.2.4.1 农杆菌感受态EHA105制备 | 第59-60页 |
| 2.2.4.2 电击法转化农杆菌感受态细胞 | 第60页 |
| 2.2.4.3 拟南芥转化的花序侵染法 | 第60页 |
| 2.2.5 拟南芥中总DNA的粗提取 | 第60-61页 |
| 2.2.6 拟南芥中总RNA的提取 | 第61-62页 |
| 2.2.7 RT-PCR | 第62页 |
| 2.2.8 拟南芥中总蛋白的提取 | 第62-63页 |
| 2.2.9 蛋白免疫沉淀实验 | 第63-64页 |
| 2.2.10 核质分离实验 | 第64-65页 |
| 2.2.11 Western blot实验 | 第65-66页 |
| 2.2.12 CLIP-seq建库流程 | 第66-73页 |
| 2.2.13 PAS-seq文库流程 | 第73-76页 |
| 2.2.14 RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP） | 第76-77页 |
| 2.2.15 蛋白质的原核表达 | 第77-78页 |
| 2.2.16 抗体纯化 | 第78-79页 |
| 2.2.17 Pull-down实验 | 第79-80页 |
| 2.2.18 烟草中瞬时表达蛋白 | 第80-81页 |
| 3 结果与分析 | 第81-107页 |
| 3.1 HLP1抗体的制备与纯化 | 第81-82页 |
| 3.2 HLP1在植物体内结合靶RNA的特征分析 | 第82-86页 |
| 3.2.1 HLP1 CLIP-seq文库的构建 | 第82-83页 |
| 3.2.2 HLP1结合RNA序列的验证 | 第83页 |
| 3.2.3 HLP1结合RNA序列与开花明显相关 | 第83-86页 |
| 3.3 PAS-seq揭示HLP1调控多聚腺苷酸化位点的选择 | 第86-88页 |
| 3.3.1 PAS-seq文库的构建及数据分析 | 第86页 |
| 3.3.2 HLP1对APA的调控 | 第86-87页 |
| 3.3.3 HLP1对APA调控的验证 | 第87-88页 |
| 3.4 HLP1对FCA的APA调控 | 第88-92页 |
| 3.5 HLP2蛋白的命名 | 第92-93页 |
| 3.6 HLP2相关突变体的鉴定与表型分析 | 第93-94页 |
| 3.7 hlp1hlp2双突变体胚胎致死 | 第94-98页 |
| 3.7.1 测交实验 | 第95页 |
| 3.7.2 hlp1hlp2双突变体败育胚胎统计分析 | 第95-97页 |
| 3.7.3 hlp1hlp2双突变体败育胚胎表型分析 | 第97-98页 |
| 3.8 HLP1与HLP2的性质与功能比较研究 | 第98-101页 |
| 3.8.1 HLP1和HLP2蛋白的亚细胞定位 | 第98-99页 |
| 3.8.2 GUS染色比较HLP1与HLP2的表达模式 | 第99页 |
| 3.8.3 HLP1与HLP2协同调控特定基因poly（A）位点的选择 | 第99-101页 |
| 3.8.4 HLP1与HLP2协同促进FCA转录本远端poly（A）位点的选择 | 第101页 |
| 3.9 HLP1与HLP2存在相互作用 | 第101-103页 |
| 3.10 HLP1在转录后水平调控HLP2的基因表达 | 第103-107页 |
| 3.10.1 HLP2前体mRNA可以编码两种不同形式的成熟转录本 | 第103-104页 |
| 3.10.2 HLP1调控HLP2前体mRNA的APA | 第104-106页 |
| 3.10.3 HLP1对HLP2的表达调控不发生在蛋白水平 | 第106-107页 |
| 4 讨论 | 第107-109页 |
| 5 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第127页 |
