| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 病原学特征 | 第13-14页 |
| 1.2 生活史 | 第14页 |
| 1.3 流行病学 | 第14-15页 |
| 1.4 临床症状及病理变化 | 第15页 |
| 1.5 诊断技术 | 第15-19页 |
| 1.5.1 病原学诊断 | 第15-16页 |
| 1.5.2 血涂片镜检 | 第16页 |
| 1.5.3 动物接种试验 | 第16页 |
| 1.5.4 体外培养 | 第16页 |
| 1.5.5 血清学诊断 | 第16-17页 |
| 1.5.5.1 补体结合试验（CFT） | 第16页 |
| 1.5.5.2 间接免疫荧光抗体试验（IFA） | 第16-17页 |
| 1.5.5.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第17页 |
| 1.5.6 分子生物学诊断 | 第17-19页 |
| 1.5.6.1 核酸探针检测方法（DNA probe） | 第17-18页 |
| 1.5.6.2 聚合酶链式反应（PCR） | 第18页 |
| 1.5.3.3 实时荧光定量PCR | 第18页 |
| 1.5.6.4 反向线性印迹技术（RLB） | 第18页 |
| 1.5.6.5 环介导等温扩增（LAMP） | 第18-19页 |
| 1.6 无浆体的相关蛋白研究进展 | 第19页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 目的蛋白的筛选及其生物信息学分析 | 第21-29页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.3.1 菌株 | 第21页 |
| 2.1.3.2 实验动物和血清 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌体纯化 | 第22页 |
| 2.2.2 血清纯化 | 第22-23页 |
| 2.3 质谱和生物信息学分析（Mass spectrometric analysis and bioinformationanalysis） | 第23页 |
| 2.4 结果 | 第23-28页 |
| 2.4.1 羊无浆体的体内繁殖及纯化 | 第23-24页 |
| 2.4.2 纯化后的抗体SDS-PAGE分析结果 | 第24页 |
| 2.4.3 银染验证IP结果 | 第24-25页 |
| 2.4.4 质谱和生物信息学分析结果 | 第25-28页 |
| 2.4.4.1 蛋白的理化性质分析 | 第25-26页 |
| 2.4.4.2 蛋白的信号肽预测 | 第26-27页 |
| 2.4.4.3 蛋白的跨膜特征 | 第27页 |
| 2.4.4.4 蛋白的抗原性预测 | 第27-28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 羊无浆体AAAP基因的克隆表达及多克隆抗体制备 | 第29-37页 |
| 3.1 材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 血清 | 第29-30页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第30页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.3 PCR产物目的片段胶回收 | 第31页 |
| 3.2.4 构建克隆载体pGEM-T Easy/AAAP | 第31页 |
| 3.2.5 表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.6 BL21-pET-30a/AAAP的诱导表达 | 第32页 |
| 3.2.7 重组蛋白的可溶性分析 | 第32页 |
| 3.2.8 重组蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 3.2.9 重组蛋白的反应原性测定 | 第33页 |
| 3.2.10 兔源抗体的制备及特异性的判定 | 第33页 |
| 3.3 结果 | 第33-36页 |
| 3.3.1 羊无浆体AAAP基因的扩增 | 第33-34页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达和纯化 | 第34-35页 |
| 3.3.3 重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第35页 |
| 3.3.4 多克隆抗体对天然蛋白的识别 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 羊无浆体间接ELISA检测方法的建立 | 第37-50页 |
| 4.1 材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 抗原的制备 | 第37-38页 |
| 4.1.4 血清的采集 | 第38页 |
| 4.1.4.1 标准阴阳性性血清 | 第38页 |
| 4.1.4.2 阴阳性血清及其它血清 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-41页 |
| 4.2.1 间接ELISA试验程序 | 第38-39页 |
| 4.2.2 ELISA最佳反应条件筛选 | 第39-41页 |
| 4.2.2.1 抗原和抗体最佳工作浓度的筛选 | 第39页 |
| 4.2.2.2 酶结合物最佳稀释度的判定 | 第39-40页 |
| 4.2.2.3 封闭液的选择 | 第40页 |
| 4.2.2.4 ELISA阳性阈值和特异性、敏感性的判定 | 第40页 |
| 4.2.2.5 特异性实验（交叉实验） | 第40页 |
| 4.2.2.6 抗体动态曲线的评价 | 第40-41页 |
| 4.2.2.7 中国部分地区羊无浆体病的血清学流行病学调查 | 第41页 |
| 4.3 结果 | 第41-47页 |
| 4.3.1 ELISA最佳反应条件的选择 | 第41-42页 |
| 4.3.1.1 抗原最佳稀释度的判定 | 第41页 |
| 4.3.1.2 血清最佳稀释度的判定 | 第41-42页 |
| 4.3.1.3 酶结合物最佳工作浓度的判定 | 第42页 |
| 4.3.1.4 封闭液的选择 | 第42页 |
| 4.3.2 ELISA阳性阈值和特异性、敏感性的确定 | 第42-43页 |
| 4.3.3 特异性试验（交叉试验） | 第43页 |
| 4.3.4 抗体动态曲线的评价 | 第43-45页 |
| 4.3.5 中国部分地区羊无浆体病的血清学流行病学调查 | 第45-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-50页 |
| 第五章 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
