| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 高等药用真菌 | 第14页 |
| 1.2 灵芝及其生物活性成分 | 第14-15页 |
| 1.2.1 灵芝 | 第14-15页 |
| 1.2.2 灵芝的生物活性成分 | 第15页 |
| 1.3 灵芝酸的结构、种类及药用价值 | 第15-18页 |
| 1.4 灵芝酸的生物合成途径的研究 | 第18-19页 |
| 1.5 灵芝酸等活性成分的发酵生产及研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6 立题的目的和意义 | 第20-21页 |
| 1.7 本论文的主要研究内容与技术路线 | 第21-24页 |
| 第二章 氧化鲨烯合酶基因的克隆及高表达氧化鲨烯合酶基因工程菌株的构建 | 第24-50页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 SE基因的克隆 | 第25-30页 |
| 2.2.2 表达载体pJW-EXP-SE的构建 | 第30-36页 |
| 2.2.3 高表达SE基因工程菌株的构建 | 第36-40页 |
| 2.3 实验结果 | 第40-49页 |
| 2.3.1 SE基因克隆结果 | 第40-44页 |
| 2.3.2 表达载体pJW-EXP-SE的验证 | 第44-47页 |
| 2.3.3 高表达SE基因工程菌株的构建结果 | 第47-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 高表达SE基因对灵芝酸的积累以及灵芝酸合成相关基因表达的影响 | 第50-66页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第50-51页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-58页 |
| 3.2.1 高表达SE基因灵芝工程菌株悬浮发酵培养 | 第51-52页 |
| 3.2.2 灵芝细胞干重及培养基中残糖含量的测定 | 第52-53页 |
| 3.2.3 悬浮培养条件下总灵芝酸的提取与检测 | 第53-54页 |
| 3.2.4 悬浮培养条件下灵芝酸单体的提取与检测 | 第54-56页 |
| 3.2.5 灵芝酸合成相关基因hmgr,sqs,se,ls水平的检测 | 第56-58页 |
| 3.2.6 数据处理与分析方法 | 第58页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第58-64页 |
| 3.3.1 SE对灵芝细胞的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.2 SE在灵芝细胞中的表达对细胞生长的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.3 SE在灵芝细胞中的表达提高了总灵芝酸产量 | 第60-61页 |
| 3.3.4 SE在灵芝细胞中的表达提高了灵芝酸单体的含量 | 第61-63页 |
| 3.3.5 高表达SE基因对灵芝酸合成相关基因hmgr,sqs,se,ls表达量的影响 | 第63-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-66页 |
| 第四章 通过共表达HMGR基因和SE基因进一步提高灵芝酸的产量 | 第66-72页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第66-67页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 4.2.1 共表达HMGR基因和SE基因灵芝工程菌株的构建 | 第67-68页 |
| 4.2.2 共表达HMGR基因和SE基因灵芝工程菌株发酵培养 | 第68页 |
| 4.2.3 H-S工程菌株细胞干重的测定 | 第68-69页 |
| 4.2.4 H-S灵芝工程菌株悬浮培养条件下总灵芝酸和单体灵芝酸的提取与检测 | 第69页 |
| 4.2.5 数据处理与分析方法 | 第69页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第69-71页 |
| 4.3.1 H-S灵芝工程的验证结果 | 第69-70页 |
| 4.3.2 共表达HMGR和SE基因对灵芝细胞干重和灵芝酸产量的影响 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 全文结论 | 第72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 5.3 本文创新点 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第80-81页 |
| 附录B 标准曲线及荧光定量相关曲线 | 第81-82页 |
