| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 HB-EGF简介 | 第13-20页 |
| 1.1.1 HB-EGF的基因结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 HB-EGF的加工和信号通路 | 第14页 |
| 1.1.3 HB-EGF与乳腺癌 | 第14-16页 |
| 1.1.4 HB-EGF与卵巢癌 | 第16-18页 |
| 1.1.5 HB-EGF在其他肿瘤中的作用 | 第18-19页 |
| 1.1.6 利用HB-EGF抗癌的探索 | 第19-20页 |
| 1.2 噬菌体展示技术在生物制药上的应用 | 第20-24页 |
| 1.2.1 筛选特异性结合配体或蛋白的生物活性肽 | 第21页 |
| 1.2.2 蛋白-蛋白互作 | 第21-22页 |
| 1.2.3 筛选细胞特异性结合多肽 | 第22-23页 |
| 1.2.4 淘选器官特异性结合多肽 | 第23-24页 |
| 1.3 本课题的研究内容和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 sHB-EGF的原核表达 | 第25-39页 |
| 2.1 实验仪器、材料与试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.1 仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第27-30页 |
| 2.2.2 目的基因sHB-EGF的获取 | 第30-31页 |
| 2.2.3 表达载体pET-30a-His-HB-EGF的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.4 验证sHB-EGF插入载体 | 第33页 |
| 2.2.5 诱导目的蛋白(His)6-sHB-EGF的表达 | 第33-34页 |
| 2.2.6 验证(His)6-sHB-EGF的表达 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 2.3.1 pET-30a-His-sHB-EGF表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.2 验证(His)6-sHB-EGF的表达 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第37-39页 |
| 第三章 sHB-EGF的纯化 | 第39-44页 |
| 3.1 实验仪器、材料与试剂 | 第39页 |
| 3.1.1 仪器 | 第39页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 缓冲液的配制 | 第39-40页 |
| 3.2.2 镍柱亲和层析 | 第40页 |
| 3.2.3 肝素亲和层析 | 第40-41页 |
| 3.2.4 肠激酶切去重组蛋白(His)6标签 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-42页 |
| 3.3.1 蛋白纯化和酶切去(His)6标签 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第42-44页 |
| 第四章 sHB-EGF对卵巢癌细胞SKOV3的作用 | 第44-56页 |
| 4.1 实验仪器、材料与试剂 | 第44-46页 |
| 4.1.1 仪器 | 第44页 |
| 4.1.2 材料与试剂 | 第44-46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-51页 |
| 4.2.1 试剂配制 | 第46页 |
| 4.2.2 MTT检测sHB-EGF对细胞增殖率的影响 | 第46-47页 |
| 4.2.3 sHB-EGF过表达对癌细胞迁移侵润的影响 | 第47-49页 |
| 4.2.4 sHB-EGF敲减对癌细胞迁移侵润的影响 | 第49-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-55页 |
| 4.3.1 sHB-EGF对癌细胞增殖的影响 | 第51页 |
| 4.3.2 sHB-EGF对癌细胞迁移和侵润的影响 | 第51-55页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第55-56页 |
| 第五章 噬菌体展示预实验 | 第56-65页 |
| 5.1 实验仪器、材料与试剂 | 第56-57页 |
| 5.1.1 仪器 | 第56页 |
| 5.1.2 材料与试剂 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-63页 |
| 5.2.1 试剂配制 | 第57-60页 |
| 5.2.2 噬菌体滴度测定 | 第60页 |
| 5.2.3 淘选流程 | 第60-62页 |
| 5.2.4 单克隆噬菌体扩增 | 第62页 |
| 5.2.5 测序 | 第62-63页 |
| 5.3 实验结果 | 第63-64页 |
| 5.3.1 随机序列分析 | 第63-64页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第64-65页 |
| 第六章 淘选特异性结合sHB-EGF的多肽 | 第65-70页 |
| 6.1 实验仪器、材料与试剂 | 第65页 |
| 6.1.1 仪器 | 第65页 |
| 6.1.2 材料与试剂 | 第65页 |
| 6.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 6.2.1 试剂配制 | 第65页 |
| 6.2.2 噬菌体滴度测定 | 第65-66页 |
| 6.2.3 淘选流程 | 第66页 |
| 6.2.4 单克隆噬菌体扩增 | 第66页 |
| 6.2.5 测序 | 第66页 |
| 6.2.6 ELISA检测多肽与靶分子的亲和力 | 第66-67页 |
| 6.3 结果与分析 | 第67-69页 |
| 6.3.1 随机多肽序列分析 | 第67-68页 |
| 6.3.2 候选多肽TUZG1、TUZG2和TUZG3与靶分子的亲和力验证 | 第68-69页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第69-70页 |
| 第七章 候选多肽的生物学效应验证 | 第70-76页 |
| 7.1 实验仪器、材料与试剂 | 第70页 |
| 7.1.1 仪器 | 第70页 |
| 7.1.2 材料与试剂 | 第70页 |
| 7.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 7.2.1 试剂配制 | 第70页 |
| 7.2.2 随机肽Random 12的非特异性验证 | 第70页 |
| 7.2.3 候选多肽TUZG1和TUZG2对癌细胞迁移和侵润的影响 | 第70-71页 |
| 7.2.4 候选多肽TUZG3的抑癌效应验证 | 第71页 |
| 7.2.5 TUZG1和TUZG2抗凝血作用检测 | 第71-72页 |
| 7.3 结果与分析 | 第72-75页 |
| 7.3.1 TUZG1和TUZG2对癌细胞迁移和侵润的影响 | 第72页 |
| 7.3.2 多肽TUZG3对癌细胞迁移和侵润的影响 | 第72-73页 |
| 7.3.3 TUZG1和TUZG2抗凝血作用检测 | 第73-75页 |
| 7.4 讨论与小结 | 第75-76页 |
| 第八章 总结与展望 | 第76-78页 |
| 8.1 工作总结 | 第76页 |
| 8.2 工作展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第88页 |
