| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第10-32页 |
| 1.1 生物传感器 | 第10-20页 |
| 1.1.1 生物传感器的结构 | 第10-12页 |
| 1.1.2 生物传感器的原理 | 第12页 |
| 1.1.3 生物传感器的特点 | 第12页 |
| 1.1.4 生物传感器的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.5 DNA生物传感方法简介 | 第13-15页 |
| 1.1.5.1 DNA分子的结构特点 | 第13-15页 |
| 1.1.5.2 DNA生物传感器的原理 | 第15页 |
| 1.1.5.3 DNA 生物传感的分类 | 第15页 |
| 1.1.6 DNA循环放大技术 | 第15-16页 |
| 1.1.6.1 聚合酶链式反应 | 第15-16页 |
| 1.1.6.2 聚合酶链替代反应 | 第16页 |
| 1.1.6.3 杂交链式反应 | 第16页 |
| 1.1.7 荧光探针 | 第16-20页 |
| 1.1.7.1 荧光分析特点 | 第17页 |
| 1.1.7.2 DNA荧光探针发展 | 第17-18页 |
| 1.1.7.3 影响荧光的因素 | 第18-19页 |
| 1.1.7.4 荧光的猝灭 | 第19-20页 |
| 1.2 肿瘤细胞与肿瘤标志物 | 第20-27页 |
| 1.2.1 肿瘤的定义及分类 | 第20页 |
| 1.2.2 肿瘤细胞的特点 | 第20-21页 |
| 1.2.3 肿瘤标志物及分类 | 第21页 |
| 1.2.4 目前对肿瘤标志物的检测方法 | 第21-22页 |
| 1.2.5 端粒与端粒酶 | 第22-25页 |
| 1.2.5.1 端粒的结构及功能 | 第22页 |
| 1.2.5.2 端粒酶的结构与功能 | 第22-23页 |
| 1.2.5.3 端粒酶与肿瘤细胞的联系 | 第23页 |
| 1.2.5.4 端粒酶活性的检测 | 第23-24页 |
| 1.2.5.5 细胞裂解方法 | 第24-25页 |
| 1.2.5.6 裂解液的组分 | 第25页 |
| 1.2.6 ATP的性质及作用 | 第25-27页 |
| 1.2.6.1 ATP简介 | 第25页 |
| 1.2.6.2 ATP的化学性质 | 第25-26页 |
| 1.2.6.3 ATP检测的方法 | 第26-27页 |
| 1.3 生物纳米材料在生物分析领域的应用 | 第27-29页 |
| 1.3.1 纳米材料的概念与特性 | 第27页 |
| 1.3.2 常见的纳米材料 | 第27-29页 |
| 1.3.2.1 石墨烯的概念和性质 | 第27-28页 |
| 1.3.2.2 WS2纳米材料的概念和性质 | 第28-29页 |
| 1.4 立体依据与主要内容 | 第29-32页 |
| 第二章 基于Exo-III剪切辅助等温循环放大荧光检测肿瘤细胞中端粒酶的活性 | 第32-52页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 实验部分 | 第33-36页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.1.1 实验试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.1.2 实验仪器 | 第34页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.2.2.1 缓冲溶液的配置与DNA的前处理 | 第34页 |
| 2.2.2.2 端粒酶的扩链反应 | 第34-35页 |
| 2.2.2.3 核酸外切酶Exo-Ш的剪切循环反应 | 第35页 |
| 2.2.2.4 荧光检测 | 第35页 |
| 2.2.2.5 细胞培养 | 第35页 |
| 2.2.2.6 细胞中端粒酶的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.2.7 酶联免疫法检测端粒酶 | 第36页 |
| 2.2.2.8 凝胶电泳验证可行性 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-51页 |
| 2.3.1 荧光检测端粒酶活性的实验原理 | 第36-37页 |
| 2.3.2 端粒酶检测实验可行性 | 第37-40页 |
| 2.3.3 实验条件的优化 | 第40-45页 |
| 2.3.3.1 反应体系缓冲溶液p H的优化 | 第40-41页 |
| 2.3.3.2 反应体系温度的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.3.3 猝灭DNA与探针DNA比值的优化 | 第42-43页 |
| 2.3.3.4 猝灭DNA与端粒酶前体量的优化 | 第43-44页 |
| 2.3.3.5 核酸外切酶Exo-III的优化 | 第44-45页 |
| 2.3.3.6 反应时间的优化 | 第45页 |
| 2.3.4 商品化的端粒酶活性的检测 | 第45-48页 |
| 2.3.4.1 扩链反应后端粒酶活性检测 | 第46-47页 |
| 2.3.4.2 水解反应后端粒酶活性的检测 | 第47页 |
| 2.3.4.3 实验方案的重现性 | 第47-48页 |
| 2.3.5 细胞中端粒酶活性的检测 | 第48-49页 |
| 2.3.5.1 Hela细胞中端粒酶的检测 | 第48-49页 |
| 2.3.5.2 Romas细胞中端粒酶的检测 | 第49页 |
| 2.3.6 端粒酶选择性检测 | 第49-50页 |
| 2.3.7 与传统ELISA方法的比较 | 第50-51页 |
| 2.4 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 基于链置换循环反应荧光检测高浓度细胞提取液中端粒酶的活性 | 第52-70页 |
| 3.1 引言 | 第52-53页 |
| 3.2 实验部分 | 第53-55页 |
| 3.2.1 试剂与仪器 | 第53-54页 |
| 3.2.1.1 实验试剂 | 第53页 |
| 3.2.1.2 实验仪器 | 第53-54页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 3.2.2.1 缓冲溶液的配置与DNA的预处理 | 第54页 |
| 3.2.2.2 磁珠的活化 | 第54页 |
| 3.2.2.3 PSM荧光信号探针的制备 | 第54页 |
| 3.2.2.4 发卡DNA磁性探针的制备 | 第54-55页 |
| 3.2.2.5 端粒酶的活性检测 | 第55页 |
| 3.2.2.6 细胞中端粒酶的提取 | 第55页 |
| 3.2.2.7 酶联免疫法检测端粒酶 | 第55页 |
| 3.3 结果与分析 | 第55-68页 |
| 3.3.1 荧光检测端粒酶的原理 | 第55-56页 |
| 3.3.2 表征 | 第56-60页 |
| 3.3.2.1 透射电镜表征 | 第56-57页 |
| 3.3.2.2 红外表征 | 第57-58页 |
| 3.3.2.3 AFM表征 | 第58-60页 |
| 3.3.2.4 电泳表征 | 第60页 |
| 3.3.3 可行性验证 | 第60-61页 |
| 3.3.4 实验条件的优化 | 第61-64页 |
| 3.3.4.1 缓冲溶液p H的优化 | 第61-62页 |
| 3.3.4.2 反应温度的优化 | 第62-63页 |
| 3.3.4.3 反应时间的优化 | 第63页 |
| 3.3.4.4 端粒酶前体量的优化 | 第63-64页 |
| 3.3.5 商品化端粒酶的检测 | 第64-65页 |
| 3.3.6 细胞中端粒酶活性检测 | 第65-66页 |
| 3.3.7 端粒酶的特异性选择 | 第66页 |
| 3.3.8 传统ELISA方法检测端粒酶 | 第66-67页 |
| 3.3.9 与传统ELISA方法的对比 | 第67-68页 |
| 3.4 小结 | 第68-70页 |
| 第四章 基于等温链取代同时荧光检测ATP和谷胱甘肽 | 第70-86页 |
| 4.1 引言 | 第70-71页 |
| 4.2 实验部分 | 第71-74页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第71-72页 |
| 4.2.1.1 实验试剂 | 第71-72页 |
| 4.2.1.2 实验仪器 | 第72页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 4.2.2.1 缓冲溶液的配置与DNA的预处理 | 第72-73页 |
| 4.2.2.2 PAA修饰的WS2纳米薄层的制备 | 第73页 |
| 4.2.2.3 磁珠的活化 | 第73页 |
| 4.2.2.4 磁珠与DNA结合 | 第73页 |
| 4.2.2.5 磁珠的SPDP功能化 | 第73-74页 |
| 4.2.2.6 功能化的磁珠与巯基DNA的结合 | 第74页 |
| 4.2.2.7 ATP的检测 | 第74页 |
| 4.2.2.8 WS2纳米薄层的荧光猝灭 | 第74页 |
| 4.2.2.9 谷胱甘肽的还原检测 | 第74页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第74-85页 |
| 4.3.1 荧光检测ATP和谷胱甘肽的原理图 | 第74-75页 |
| 4.3.2 DNA修饰磁珠的验证 | 第75-76页 |
| 4.3.3 实验方案可行性检验 | 第76-77页 |
| 4.3.4 实验条件的优化 | 第77-82页 |
| 4.3.4.1. 溶液p H的优化 | 第77-79页 |
| 4.3.4.1.1 ATP与适体结合p H值的选择 | 第77-78页 |
| 4.3.4.1.2. 谷胱甘肽打开二硫建对p H值的选择 | 第78-79页 |
| 4.3.4.3 反应温度的优化 | 第79-80页 |
| 4.3.4.4 反应时间的优化 | 第80-82页 |
| 4.3.4.4.1 ATP与适体结合的时间优化 | 第80-81页 |
| 4.3.4.4.2 WS2猝灭荧光链的时间优化 | 第81页 |
| 4.3.4.4.3 谷胱甘肽打开二硫键的时间优化 | 第81-82页 |
| 4.3.5 ATP浓度检测 | 第82-83页 |
| 4.3.6 谷胱甘肽的浓度检测 | 第83-84页 |
| 4.3.7 选择性的检测 | 第84-85页 |
| 4.4 小结 | 第85-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第100-101页 |
