| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1.1 概述 | 第14-16页 |
| 1.2 转基因技术的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.2.1 PiggyBac转座子系统 | 第16-18页 |
| 1.2.2 新型基因编辑技术 | 第18-24页 |
| 1.3 茧丝素材创新研究进展 | 第24-28页 |
| 1.3.1 丝胶融合表达载体的素材创新 | 第24-25页 |
| 1.3.2 丝素融合表达载体的素材创新 | 第25-28页 |
| 1.4 人类表皮生长因子研究进展 | 第28-30页 |
| 第二章 引言 | 第30-32页 |
| 2.1 研究背景与意义 | 第30页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第30-31页 |
| 2.3 技术路线 | 第31-32页 |
| 第三章 hEGF-重链融合蛋白转基因表达载体的设计和构建 | 第32-40页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要溶液及其配置 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第33页 |
| 3.2.2 目的片段的克隆 | 第33-36页 |
| 3.2.3 转基因表达载体的设计和构建 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 hEGF基因片段的合成 | 第36-37页 |
| 3.3.2 转基因表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重链融合蛋白氨基酸序列比较 | 第38页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 hEGF转基因品系的建立和分子鉴定 | 第40-52页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 主要溶液及其配置 | 第40-41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-47页 |
| 4.2.1 转基因载体的显微注射 | 第41-42页 |
| 4.2.2 转基因阳性个体家蚕的筛选与饲养 | 第42页 |
| 4.2.3 转基因阳性个体的分子鉴定 | 第42-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.3.1 显微注射及转基因阳性个体的筛选统计 | 第47-48页 |
| 4.3.2 外源基因片段插入拷贝数分析 | 第48-49页 |
| 4.3.3 外源基因片段插入位点分析 | 第49-50页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 转基因蚕茧中hEGF-重链融合蛋白的分子检测 | 第52-58页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第52-53页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第52页 |
| 5.1.2 主要仪器和试剂 | 第52页 |
| 5.1.3 主要溶液及其配置 | 第52-53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 5.2.1 蚕丝总蛋白样品制备 | 第53页 |
| 5.2.2 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第53-54页 |
| 5.2.3 Western blotting检测 | 第54页 |
| 5.2.4 hEGF纯蛋白含量计算 | 第54页 |
| 5.3 结果与分析 | 第54-56页 |
| 5.3.1 hEGF-重链融合蛋白的分子检测 | 第54-56页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 转基因蚕茧中hEGF-重链融合蛋白生物学活性检测 | 第58-64页 |
| 6.1 实验材料与试剂 | 第58-59页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第58页 |
| 6.1.2 主要仪器和试剂 | 第58页 |
| 6.1.3 主要溶液及其配置 | 第58-59页 |
| 6.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 6.2.1 脱胶茧丝的制备 | 第59页 |
| 6.2.2 脱胶茧片的制备 | 第59页 |
| 6.2.3 细胞培养和传代 | 第59页 |
| 6.2.4 Brdu免疫荧光分析 | 第59-60页 |
| 6.2.5 MTT细胞增殖检测 | 第60页 |
| 6.3 实验结果 | 第60-63页 |
| 6.3.1 Brdu免疫荧光结果与分析 | 第60-62页 |
| 6.3.2 MTT细胞增殖数据统计与分析 | 第62-63页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第63-64页 |
| 第七章 总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 在校期间发表的文章及科研情况 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
