| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 论文创新点 | 第17-18页 |
| 缩略词表 | 第18-21页 |
| 引言 | 第21-25页 |
| 实验仪器和材料 | 第25-28页 |
| 1 动物、细胞株 | 第25页 |
| 2 仪器 | 第25页 |
| 3 仪器及耗材 | 第25-26页 |
| 4 溶液的配制 | 第26-28页 |
| 实验方法 | 第28-36页 |
| 1 细胞培养 | 第28-29页 |
| 1.1 原代小鼠胚胎成纤维细胞制备 | 第28页 |
| 1.2 饲养层的制备 | 第28页 |
| 1.3 小鼠ES细胞的支持培养 | 第28-29页 |
| 2 miRNA转染ES细胞及分化培养 | 第29页 |
| 2.1 miR-218 mimic/inhibitor转染 | 第29页 |
| 2.2 悬滴培养 | 第29页 |
| 2.3 悬浮培养 | 第29页 |
| 2.4 贴壁培养 | 第29页 |
| 3 Western blotting检测蛋白表达 | 第29-30页 |
| 3.1 总蛋白提取 | 第30页 |
| 3.2 蛋白印迹实验 | 第30页 |
| 4 实时定量PCR | 第30-31页 |
| 5 RT-PCR基因表达检测 | 第31-32页 |
| 6 免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白α-Actinin的表达 | 第32-33页 |
| 7 流式细胞术定量检测miR-218 mimic/inhibitor对心肌特异性蛋白表达的影响 | 第33页 |
| 8 ES细胞分化为心肌细胞内钙瞬变测定 | 第33-34页 |
| 8.1 试剂配制 | 第33页 |
| 8.2 钙瞬变检测 | 第33-34页 |
| 9 细胞迁移 | 第34页 |
| 9.1 EBs中细胞迁移 | 第34页 |
| 9.2 细胞划痕实验检测miR-218 mimic/inhibitor对ES细胞迁移能力的影响 | 第34页 |
| 9.3 Transwell细胞迁移实验 | 第34页 |
| 10 靶基因预测及通路分析 | 第34-35页 |
| 11 数据分析 | 第35-36页 |
| 第一部分 miR-218表达调控对小鼠ES细胞定向分化为心肌细胞的影响 | 第36-48页 |
| 1 实验结果 | 第36-46页 |
| 1.1 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞定向心肌细胞分化率的影响 | 第36-37页 |
| 1.2 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞分化为心肌细胞肌小节结构的影响 | 第37-38页 |
| 1.3 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞分化为心肌细胞数量的影响 | 第38-39页 |
| 1.4 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞衍生心肌细胞钙瞬变的影响 | 第39-40页 |
| 1.5 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞分化为EBs时中胚层形成的影响 | 第40-41页 |
| 1.6 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞定向分化为心肌细胞中早期心肌特异性转录因子蛋白及基因表达的影响 | 第41-42页 |
| 1.7 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞定向分化为心肌细胞中心肌特异性蛋白表达的影响 | 第42-44页 |
| 1.8 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞体外定向分化的心肌细胞中心肌功能调控相关蛋白表达的影响 | 第44-46页 |
| 2 讨论 | 第46-47页 |
| 3 小结 | 第47-48页 |
| 第二部分 miR-218在小鼠ES细胞定向心肌分化过程中对靶向基因调控作用研究 | 第48-63页 |
| 1 实验结果 | 第48-59页 |
| 1.1 miR-218靶基因预测和通路分析 | 第48-53页 |
| 1.2 miR-218 mimic/inhibitor在小鼠ES细胞体外定向心肌分化过程中对Rictor、Pik3r1、Pi4k2a、Adcy1、Shank2、Pdgfr-α、Grml和Gnai2基因水平表达的影响 | 第53-54页 |
| 1.3 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠EBs细胞体外迁移的影响 | 第54-55页 |
| 1.4 miR-218 mimic/inhibitor对ES细胞体外迁移的影响 | 第55-58页 |
| 1.5 miR-218 mimic/inhibitor对小鼠ES细胞迁移相关蛋白表达的影响 | 第58-59页 |
| 2 讨论 | 第59-62页 |
| 3 小结 | 第62-63页 |
| 总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 综述 miRNA调控胚胎干细胞自我更新及分化的研究进展 | 第74-86页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 作者简历及在读期间所取得研究成果 | 第86-87页 |
