致谢 | 第7-11页 |
摘要 | 第11-14页 |
1 真菌蛋白质组学和修饰化组学的研究现状 | 第14-23页 |
1.1 表达水平的蛋白质组学 | 第14-15页 |
1.2 修饰水平的蛋白质组学 | 第15-19页 |
1.2.1 PTM蛋白组富集 | 第16页 |
1.2.2 磷酸化修饰组学 | 第16-17页 |
1.2.3 乙酰化修饰组学 | 第17-19页 |
1.3 定量蛋白组学 | 第19-21页 |
1.4 真菌MAPK信号通路的研究现状 | 第21-22页 |
1.5 展望 | 第22-23页 |
2 球孢白僵菌信号枢纽Cdc14介导的蛋白/磷酸化修饰组 | 第23-37页 |
2.1 材料与试剂 | 第24-25页 |
2.1.1 菌株与培养基 | 第24页 |
2.1.2 试剂 | 第24-25页 |
2.2 实验方法 | 第25-28页 |
2.2.1 普通蛋白肽段和磷酸化蛋白肽段的样品制备 | 第25-26页 |
2.2.2 iTRAQ标记肽段 | 第26页 |
2.2.3 高效液相色谱分离肽段 | 第26页 |
2.2.4 磷酸化肽段的富集 | 第26页 |
2.2.5 肽段和磷酸化肽段的LC-MS/MS定量分析 | 第26-27页 |
2.2.6 生物信息学分析 | 第27-28页 |
2.3 结果与分析 | 第28-35页 |
2.3.1 质谱质量的校检 | 第28-29页 |
2.3.2 Cdc14介导的蛋白组和磷酸化蛋白组的特征 | 第29-31页 |
2.3.3 Cdc14介导的磷酸化位点偏好性 | 第31-33页 |
2.3.4 球孢白僵茵Cdc14调节的生长发育及其关联的蛋白和磷酸化蛋白 | 第33-34页 |
2.3.5 球孢白僵菌Cdc14介导的多胁迫应答及其关联的蛋白和磷酸化蛋白 | 第34-35页 |
2.4 结论 | 第35-37页 |
3 球孢白僵菌信号传导激酶Ste7及其磷酸化位点的功能解析 | 第37-55页 |
3.1 材料 | 第38-39页 |
3.1.1 菌株和培养基 | 第38页 |
3.1.2 试剂及试剂盒 | 第38-39页 |
3.2 方法 | 第39-45页 |
3.2.1 球孢白僵菌核酸提取 | 第39-40页 |
3.2.2 球孢白僵菌Ste7的序列分析 | 第40页 |
3.2.3 球孢白僵菌ste7突变株构建与鉴定 | 第40-41页 |
3.2.4 表型实验 | 第41-43页 |
3.2.5 表型相关基因转录水平的检测 | 第43页 |
3.2.6 酶活测定 | 第43-45页 |
3.2.7 数据分析 | 第45页 |
3.3 结果 | 第45-53页 |
3.3.1 球孢白僵菌Ste7的基本特征及磷酸化位点 | 第45-46页 |
3.3.2 Ste7缺失及磷酸化位点突变对营养生长、无性发育及发育必需基因表达的影响 | 第46-49页 |
3.3.3 Ste7缺失及磷酸化位点突变对毒力及体壁降解酶酶活的影响 | 第49-51页 |
3.3.4 Ste7缺失及磷酸化位点突变改变胁迫应答及其关联酶系的基因表达 | 第51-53页 |
3.4 讨论 | 第53-55页 |
4 球孢白僵菌赖氨酸乙酰化蛋白组的构建与分析 | 第55-69页 |
4.1 材料与试剂 | 第56页 |
4.1.1 菌株与培养基 | 第56页 |
4.1.2 试剂 | 第56页 |
4.2 实验方法 | 第56-59页 |
4.2.1 乙酰化肽段的制备 | 第56-57页 |
4.2.2 乙酰化肽段的富集 | 第57页 |
4.2.3 乙酰化肽段的LC-MS/MS分析 | 第57-58页 |
4.2.4 生物信息学分析 | 第58页 |
4.2.5 Pmt1和Pmt4乙酰化位点突变株的构建 | 第58页 |
4.2.6 突变株表型实验 | 第58-59页 |
4.3 结果 | 第59-67页 |
4.3.1 球孢白僵菌乙酰化组的特征 | 第59-61页 |
4.3.2 球孢白僵菌乙酰化蛋白组的功能注释和分类 | 第61-64页 |
4.3.3 球孢白僵菌乙酰化位点侧翼氨基酸的偏好性分析 | 第64-65页 |
4.3.4 球孢白僵菌乙酰化修饰的功能验证 | 第65-67页 |
4.4 讨论 | 第67-69页 |
5 结语 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-81页 |
Summary | 第81-82页 |
附录:博士期间的主要成果 | 第84页 |