| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 iPSCs相关转录因子及重组蛋白诱导研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1 Oct4简介 | 第15-16页 |
| 1.1.1 Oct4的结构特征 | 第15页 |
| 1.1.2 Oct4的表达分布 | 第15页 |
| 1.1.3 Oct4的生物学功能及其表达调控 | 第15-16页 |
| 1.2 Klf4简介 | 第16-17页 |
| 1.2.1 Klf4的结构特征 | 第16页 |
| 1.2.2 Klf4的组织分布 | 第16页 |
| 1.2.3 Klf4的生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.3 c-Myc简介 | 第17-18页 |
| 1.3.1 c-Myc的结构特征 | 第17页 |
| 1.3.2 c-Myc的表达特性 | 第17页 |
| 1.3.3 c-Myc的生物学功能及其表达调控 | 第17-18页 |
| 1.4 Lin28简介 | 第18-19页 |
| 1.4.1 Lin28的结构特征 | 第18页 |
| 1.4.2 Lin28的表达特异性 | 第18页 |
| 1.4.3 Lin28的生物学功能及其表达调控 | 第18-19页 |
| 1.5 蛋白诱导iPSCs | 第19-22页 |
| 2 重组蛋白表达研究进展 | 第22-27页 |
| 2.1 原核表达系统介绍 | 第22-23页 |
| 2.2 真核表达系统介绍 | 第23页 |
| 2.3 常见的表达系统研究进展 | 第23-26页 |
| 2.3.1 大肠杆菌表达系统 | 第23-25页 |
| 2.3.2 枯草芽胞杆菌表达系统 | 第25页 |
| 2.3.3 酵母表达系统 | 第25页 |
| 2.3.4 昆虫细胞表达系统 | 第25-26页 |
| 2.3.5 哺乳动物表达系统 | 第26页 |
| 2.4 展望 | 第26-27页 |
| 第二部分 试验研究 | 第27-50页 |
| 引言 | 第27-29页 |
| 1 材料与方法 | 第29-39页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第29页 |
| 1.2 主要仪器与试剂耗材 | 第29-32页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第29页 |
| 1.2.2 主要试剂与耗材 | 第29-30页 |
| 1.2.3 主要试剂的配制 | 第30-32页 |
| 1.3 试验方法 | 第32-38页 |
| 1.3.1 原核表达载体构建 | 第32-33页 |
| 1.3.2 重组质粒的转化与筛选 | 第33页 |
| 1.3.3 重组质粒DNA小量提取 | 第33-34页 |
| 1.3.4 双酶切和测序方法验证重构载体 | 第34页 |
| 1.3.5 重组质粒转化及重组蛋白诱导表达 | 第34-35页 |
| 1.3.6 菌体破碎 | 第35页 |
| 1.3.7 重组蛋白纯化 | 第35页 |
| 1.3.8 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第35-36页 |
| 1.3.9 考马斯亮蓝染色及脱色 | 第36-37页 |
| 1.3.10 蛋白免疫印记 | 第37页 |
| 1.3.11 LIN28-11R重组蛋白穿膜检测 | 第37-38页 |
| 1.4 试验设计 | 第38-39页 |
| 2 结果 | 第39-45页 |
| 2.1 猪LIN28、KLF4、c-MYC及OCT4基因原核表达载体的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 2.1.1 重组质粒DNA小量提取 | 第39页 |
| 2.1.2 重组表达载体的构建及酶切、测序验证 | 第39-40页 |
| 2.2 LIN28-11R重组蛋白的制备及其它三种转录因子重组蛋白表达条件的初步探索 | 第40-45页 |
| 2.2.1 LIN28-11R重组蛋白在不同条件下的诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.2.2 最佳诱导条件下LIN28-11R重组蛋白的纯化及鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.3 KLF4-11R重组蛋白的初步表达 | 第42页 |
| 2.2.4 c-MYC-11R重组蛋白的初步表达 | 第42-43页 |
| 2.2.5 OCT4-11R重组蛋白的初步表达 | 第43页 |
| 2.2.6 LIN28-11R重组蛋白穿膜检测 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-49页 |
| 3.1 猪源多能性转录因子的获取 | 第45页 |
| 3.2 重组蛋白表达系统的构建 | 第45-46页 |
| 3.3 重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第46-47页 |
| 3.4 重组蛋白的纯化及鉴定 | 第47-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 个人简历 | 第61-62页 |
