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DON诱导PC12细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-9页
英文缩写词第14-15页
文献综述第15-24页
引言第24-25页
1 材料与方法第25-36页
    1.1 试验材料第25页
    1.2 主要仪器第25-26页
    1.3 溶液配制第26-27页
    1.4 PC12细胞的培养及处理第27页
        1.4.1 PC12细胞培养第27页
        1.4.2 PC12细胞冻存与复苏第27页
    1.5 DON母液配制及试验分组第27页
    1.6 形态学观察第27-28页
        1.6.1 光学显微镜第27页
        1.6.2 透射电子显微镜第27-28页
    1.7 细胞存活率的检测—CCK-8 法第28页
    1.8 乳酸脱氢酶的测定第28页
    1.9 Hoechst 33258 荧光染色观察第28页
    1.10 Annexin V-FITC/PI双染法分析PC12细胞凋亡率第28页
    1.11 Caspase3最佳检测时间点第28-29页
    1.12 线粒体膜电位检测第29页
    1.13 实时荧光定量PCR第29-31页
        1.13.1 细胞总RNA的提取第29页
        1.13.2 RNA反转录成c DNA第29-30页
        1.13.3 目的基因引物设计第30页
        1.13.4 实时荧光定量PCR第30-31页
    1.14 Western-blot分析蛋白表达水平第31-33页
        1.14.1 细胞蛋白的提取第31页
        1.14.2 细胞蛋白含量的测定第31页
        1.14.3 SDS-PAGE凝胶电泳第31-32页
        1.14.4 转膜第32页
        1.14.5 免疫印迹杂交(Western-blot)第32-33页
    1.15 免疫荧光染色法观察Caspase3激活情况第33页
    1.16 EMSA法检测转录因子转录活性第33-35页
        1.16.1 核蛋白制备与浓度测定第33页
        1.16.2 聚丙烯酰胺凝胶的配制第33页
        1.16.3 EMSA结合反应第33-34页
        1.16.4 电泳分析第34页
        1.16.5 电转膜第34页
        1.16.6 紫外交联第34页
        1.16.7 化学发光法检测生物素标记的探针第34-35页
    1.17 数据处理第35-36页
2 结果与分析第36-46页
    2.1 DON对PC12细胞形态的影响第36-37页
    2.2 DON对PC12细胞活性的影响第37-38页
    2.3 DON对PC12细胞LDH活性的影响第38页
    2.4 DON对PC12细胞核的影响第38-39页
    2.5 DON对PC12细胞凋亡的影响第39-40页
    2.6 Caspase3最佳检测时间点第40-41页
    2.7 DON对PC12细胞线粒体膜电位的影响第41-42页
    2.8 DON对PC12细胞凋亡相关基因表达的影响第42-43页
    2.9 DON对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响第43-44页
    2.10 DON对Caspase3激活情况的影响第44-45页
    2.11 DON对转录因子转录活性的影响第45-46页
3 讨论第46-50页
    3.1 形态学变化第46页
    3.2 细胞活性、LDH以及凋亡率第46-47页
    3.3 细胞核变化第47页
    3.4 线粒体膜电位第47页
    3.5 凋亡相关基因第47-48页
    3.6 凋亡相关蛋白第48-49页
    3.7 转录因子第49-50页
4 结论第50-51页
参考文献第51-59页
致谢第59-60页
作者简介第60页

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