| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第17-32页 |
| 1.1 引言 | 第17-18页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第17-18页 |
| 1.1.2 研究目的和意义 | 第18页 |
| 1.1.3 项目来源和经费支持 | 第18页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第18-29页 |
| 1.2.1 杜仲概述 | 第18-21页 |
| 1.2.2 转录组学概述 | 第21-24页 |
| 1.2.3 植物脂肪酸概述 | 第24-29页 |
| 1.3 研究的目标和主要研究内容 | 第29-31页 |
| 1.3.1 研究目标 | 第29-30页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第30-31页 |
| 1.4 研究的技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 杜仲不同发育时期种仁的转录组测序分析 | 第32-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 实验主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.2.1 杜仲种仁总RNA的提取及质量检测 | 第33-34页 |
| 2.2.2 杜仲种仁的转录组测序 | 第34-35页 |
| 2.2.3 测序数据处理与分析 | 第35-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-58页 |
| 2.3.1 杜仲种仁总RNA的质量检测 | 第38-40页 |
| 2.3.2 转录组测序原始数据统计分析 | 第40-41页 |
| 2.3.3 转录组测序的结果与组装 | 第41-43页 |
| 2.3.4 Unigene的功能注释结果统计分析 | 第43-44页 |
| 2.3.5 Unigene的功能分类 | 第44-50页 |
| 2.3.6 SSR位点分析 | 第50-54页 |
| 2.3.7 qPCR结果验证 | 第54-57页 |
| 2.3.8 FAD3基因的差异表达分析 | 第57-58页 |
| 2.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第三章 EuFAD3基因的cDNA、基因组DNA及启动子序列克隆 | 第61-82页 |
| 3.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第62页 |
| 3.1.3 实验主要试剂 | 第62页 |
| 3.1.4 实验主要仪器 | 第62页 |
| 3.2 实验方法 | 第62-70页 |
| 3.2.1 结合转录组测序数据分析FAD3基因 | 第62-63页 |
| 3.2.2 EuFAD3基因的cDNA克隆 | 第63-69页 |
| 3.2.3 EuFAD3的基因组DNA克隆 | 第69-70页 |
| 3.2.4 EuFAD3基因的启动子克隆 | 第70页 |
| 3.3 结果与分析 | 第70-79页 |
| 3.3.1 EuFAD3基因全长cDNA序列的克隆 | 第70-75页 |
| 3.3.2 EuFAD3基因组DNA序列的克隆 | 第75-78页 |
| 3.3.3 EuFAD3基因启动子序列的克隆 | 第78-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-82页 |
| 第四章 EuFAD3基因的表达模式研究 | 第82-94页 |
| 4.1 实验材料 | 第82-83页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第82页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第82-83页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第83页 |
| 4.2 实验方法 | 第83-85页 |
| 4.2.1 杜仲种仁总RNA的提取及质量检测 | 第83页 |
| 4.2.2 cDNA第一链的合成 | 第83页 |
| 4.2.3 内参及目的基因的引物设计 | 第83-84页 |
| 4.2.4 内参及目的基因片段的克隆 | 第84页 |
| 4.2.5 内参基因的半定量PCR扩增 | 第84-85页 |
| 4.2.6 实时荧光定量PCR分析EuFAD3-1 和EuFAD3-2 基因的表达研究 | 第85页 |
| 4.3 结果与分析 | 第85-92页 |
| 4.3.1 杜仲种仁总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第85-87页 |
| 4.3.2 内参和目的基因片段的克隆与筛选 | 第87-88页 |
| 4.3.3 杜仲Actin、EuFAD3-1 和EuFAD3-2 基因的扩增曲线和溶解曲线分析 | 第88-89页 |
| 4.3.4 EuFAD3-1 基因在杜仲种仁发育不同时期中的表达特性分析 | 第89-90页 |
| 4.3.5 EuFAD3-2 基因在杜仲种仁发育不同时期中的表达特性分析 | 第90-92页 |
| 4.4 讨论 | 第92-94页 |
| 第五章 EuFAD3基因的亚细胞定位研究 | 第94-105页 |
| 5.1 实验材料 | 第94页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第94页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第94页 |
| 5.1.3 实验主要设备 | 第94页 |
| 5.2 实验方法 | 第94-101页 |
| 5.2.1 杜仲种仁FAD3基因全长cDNA序列的克隆 | 第94-95页 |
| 5.2.2 含有B接头序列的FAD3基因全长cDNA序列的克隆 | 第95页 |
| 5.2.3 FAD3基因的BP反应 | 第95-96页 |
| 5.2.4 FAD3基因的LR反应 | 第96-97页 |
| 5.2.5 重组表达载体电击法转化农杆菌 | 第97-99页 |
| 5.2.6 野生型烟草的培养 | 第99-100页 |
| 5.2.7 含有目的基因表达载体的农杆菌GV3101注射烟草 | 第100-101页 |
| 5.2.8 目的基因与内质网染料的共定位观察 | 第101页 |
| 5.3 结果与分析 | 第101-104页 |
| 5.3.1 重组表达载体转入农杆菌后的阳性鉴定 | 第101-102页 |
| 5.3.2 烟草的培养 | 第102页 |
| 5.3.3 FAD3基因在烟草叶片中的亚细胞定位分析 | 第102-104页 |
| 5.4 讨论 | 第104-105页 |
| 第六章 EuFAD3基因的遗传转化 | 第105-122页 |
| 6.1 实验材料 | 第105-106页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第105-106页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第106页 |
| 6.1.3 实验主要设备 | 第106页 |
| 6.2 实验方法 | 第106-112页 |
| 6.2.1 中间过渡型表达载体pCAMBIA1304-35S质粒的验证方法 | 第106-107页 |
| 6.2.2 EuFAD3目的基因过量表达载体的构建 | 第107-109页 |
| 6.2.3 重组超表达载体电击法转化农杆菌GV3101 | 第109页 |
| 6.2.4 野生型烟草的培养 | 第109-110页 |
| 6.2.5 叶盘法转化烟草 | 第110-111页 |
| 6.2.6 转基因烟草的阳性鉴定 | 第111-112页 |
| 6.3 结果与分析 | 第112-120页 |
| 6.3.1 中间过渡型表达载体pCAMBIA1304-35S质粒的验证 | 第112-113页 |
| 6.3.2 目的基因超表达载体的构建 | 第113-114页 |
| 6.3.3 重组超表达载体电击法转化农杆菌后的阳性鉴定 | 第114页 |
| 6.3.4 转基因烟草的获得和阳性植株的鉴定 | 第114-118页 |
| 6.3.5 转基因烟草种子中脂肪酸成分的测定 | 第118-120页 |
| 6.4 讨论 | 第120-122页 |
| 第七章 结论与展望 | 第122-124页 |
| 7.1 结论 | 第122-123页 |
| 7.2 展望 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 在读期间的学术研究 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
