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杜仲种仁转录组测序及FAD3基因的鉴定与功能研究

摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第一章 绪论第17-32页
    1.1 引言第17-18页
        1.1.1 研究背景第17-18页
        1.1.2 研究目的和意义第18页
        1.1.3 项目来源和经费支持第18页
    1.2 国内外研究进展第18-29页
        1.2.1 杜仲概述第18-21页
        1.2.2 转录组学概述第21-24页
        1.2.3 植物脂肪酸概述第24-29页
    1.3 研究的目标和主要研究内容第29-31页
        1.3.1 研究目标第29-30页
        1.3.2 主要研究内容第30-31页
    1.4 研究的技术路线第31-32页
第二章 杜仲不同发育时期种仁的转录组测序分析第32-61页
    2.1 实验材料第32-33页
        2.1.1 实验材料第32页
        2.1.2 实验主要试剂第32页
        2.1.3 实验主要仪器第32-33页
    2.2 实验方法第33-38页
        2.2.1 杜仲种仁总RNA的提取及质量检测第33-34页
        2.2.2 杜仲种仁的转录组测序第34-35页
        2.2.3 测序数据处理与分析第35-38页
    2.3 结果与分析第38-58页
        2.3.1 杜仲种仁总RNA的质量检测第38-40页
        2.3.2 转录组测序原始数据统计分析第40-41页
        2.3.3 转录组测序的结果与组装第41-43页
        2.3.4 Unigene的功能注释结果统计分析第43-44页
        2.3.5 Unigene的功能分类第44-50页
        2.3.6 SSR位点分析第50-54页
        2.3.7 qPCR结果验证第54-57页
        2.3.8 FAD3基因的差异表达分析第57-58页
    2.4 讨论第58-61页
第三章 EuFAD3基因的cDNA、基因组DNA及启动子序列克隆第61-82页
    3.1 实验材料第61-62页
        3.1.1 实验材料第61-62页
        3.1.2 菌株与质粒第62页
        3.1.3 实验主要试剂第62页
        3.1.4 实验主要仪器第62页
    3.2 实验方法第62-70页
        3.2.1 结合转录组测序数据分析FAD3基因第62-63页
        3.2.2 EuFAD3基因的cDNA克隆第63-69页
        3.2.3 EuFAD3的基因组DNA克隆第69-70页
        3.2.4 EuFAD3基因的启动子克隆第70页
    3.3 结果与分析第70-79页
        3.3.1 EuFAD3基因全长cDNA序列的克隆第70-75页
        3.3.2 EuFAD3基因组DNA序列的克隆第75-78页
        3.3.3 EuFAD3基因启动子序列的克隆第78-79页
    3.4 讨论第79-82页
第四章 EuFAD3基因的表达模式研究第82-94页
    4.1 实验材料第82-83页
        4.1.1 实验材料第82页
        4.1.2 主要试剂第82-83页
        4.1.3 仪器设备第83页
    4.2 实验方法第83-85页
        4.2.1 杜仲种仁总RNA的提取及质量检测第83页
        4.2.2 cDNA第一链的合成第83页
        4.2.3 内参及目的基因的引物设计第83-84页
        4.2.4 内参及目的基因片段的克隆第84页
        4.2.5 内参基因的半定量PCR扩增第84-85页
        4.2.6 实时荧光定量PCR分析EuFAD3-1 和EuFAD3-2 基因的表达研究第85页
    4.3 结果与分析第85-92页
        4.3.1 杜仲种仁总RNA的提取和cDNA第一链的合成第85-87页
        4.3.2 内参和目的基因片段的克隆与筛选第87-88页
        4.3.3 杜仲Actin、EuFAD3-1 和EuFAD3-2 基因的扩增曲线和溶解曲线分析第88-89页
        4.3.4 EuFAD3-1 基因在杜仲种仁发育不同时期中的表达特性分析第89-90页
        4.3.5 EuFAD3-2 基因在杜仲种仁发育不同时期中的表达特性分析第90-92页
    4.4 讨论第92-94页
第五章 EuFAD3基因的亚细胞定位研究第94-105页
    5.1 实验材料第94页
        5.1.1 实验材料第94页
        5.1.2 主要试剂第94页
        5.1.3 实验主要设备第94页
    5.2 实验方法第94-101页
        5.2.1 杜仲种仁FAD3基因全长cDNA序列的克隆第94-95页
        5.2.2 含有B接头序列的FAD3基因全长cDNA序列的克隆第95页
        5.2.3 FAD3基因的BP反应第95-96页
        5.2.4 FAD3基因的LR反应第96-97页
        5.2.5 重组表达载体电击法转化农杆菌第97-99页
        5.2.6 野生型烟草的培养第99-100页
        5.2.7 含有目的基因表达载体的农杆菌GV3101注射烟草第100-101页
        5.2.8 目的基因与内质网染料的共定位观察第101页
    5.3 结果与分析第101-104页
        5.3.1 重组表达载体转入农杆菌后的阳性鉴定第101-102页
        5.3.2 烟草的培养第102页
        5.3.3 FAD3基因在烟草叶片中的亚细胞定位分析第102-104页
    5.4 讨论第104-105页
第六章 EuFAD3基因的遗传转化第105-122页
    6.1 实验材料第105-106页
        6.1.1 实验材料第105-106页
        6.1.2 主要试剂第106页
        6.1.3 实验主要设备第106页
    6.2 实验方法第106-112页
        6.2.1 中间过渡型表达载体pCAMBIA1304-35S质粒的验证方法第106-107页
        6.2.2 EuFAD3目的基因过量表达载体的构建第107-109页
        6.2.3 重组超表达载体电击法转化农杆菌GV3101第109页
        6.2.4 野生型烟草的培养第109-110页
        6.2.5 叶盘法转化烟草第110-111页
        6.2.6 转基因烟草的阳性鉴定第111-112页
    6.3 结果与分析第112-120页
        6.3.1 中间过渡型表达载体pCAMBIA1304-35S质粒的验证第112-113页
        6.3.2 目的基因超表达载体的构建第113-114页
        6.3.3 重组超表达载体电击法转化农杆菌后的阳性鉴定第114页
        6.3.4 转基因烟草的获得和阳性植株的鉴定第114-118页
        6.3.5 转基因烟草种子中脂肪酸成分的测定第118-120页
    6.4 讨论第120-122页
第七章 结论与展望第122-124页
    7.1 结论第122-123页
    7.2 展望第123-124页
参考文献第124-136页
在读期间的学术研究第136-137页
致谢第137页

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