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热带假丝酵母遗传操作系统的建立及在二元酸合成中的应用

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 绪论第9-16页
    1.1 热带假丝酵母遗传操作第9-10页
    1.2 热带假丝酵母烷烃代谢第10-13页
        1.2.1 ω-氧化途径第10-12页
        1.2.2 β-氧化途径第12-13页
        1.2.3 CAT与酰基辅酶A合成酶第13页
    1.3 热带假丝酵母代谢工程育种第13-14页
    1.4 立题意义与研究内容第14-16页
第二章 材料与方法第16-28页
    2.1 材料第16-20页
        2.1.1 菌株和质粒第16-17页
        2.1.2 引物第17-19页
        2.1.3 主要试剂和工具酶第19页
        2.1.4 培养基第19页
        2.1.5 仪器第19-20页
    2.2 方法第20-28页
        2.2.1 酵母基因组DNA的提取第20-21页
        2.2.2 PCR扩增第21-22页
        2.2.3 重组质粒Ts-CAT1-gda-URA3的构建第22-23页
        2.2.4 重组质粒Ts-CAT1-URA3-gda的构建第23页
        2.2.5 重组质粒Ts-CAT2-gda324-URA3的构建第23页
        2.2.6 POX4和POX5基因删除盒的构建第23页
        2.2.7 重组质粒Ts-CAT2-gda324-URA3-P-GFP-T的构建第23-24页
        2.2.8 YlALK1和YlCPR1基因表达盒的构建第24页
        2.2.9 酵母转化第24-25页
        2.2.10 标记基因的弹出第25页
        2.2.11 CAT粗酶液的制备与酶活性测定第25页
        2.2.12 热带假丝酵母工程菌株二元酸发酵第25-26页
        2.2.13 发酵液中DCA12的测定第26页
        2.2.14 酵母细胞的荧光显微检测第26页
        2.2.15 qRT-PCR对热带假丝酵母mRNA转录水平分析第26-28页
第三章 结果与讨论第28-50页
    3.1 热带假丝酵母CAT基因删除突变株的构建第28-34页
        3.1.1 CAT基因敲除突变盒的构建第28-31页
        3.1.2 热带假丝酵母中CAT基因的敲除第31-33页
        3.1.3 gda序列对URA3基因丢失效率的影响第33-34页
    3.2 热带假丝酵母的CAT基因功能分析第34-37页
        3.2.1 CAT敲除对突变菌株生长的影响第34-35页
        3.2.2 CAT缺失突变菌株的酶活性测定第35-36页
        3.2.3 CAT基因敲除对菌株DCA12积累的影响第36-37页
    3.3 热带假丝酵母POX4和POX5基因删除突变株的构建第37-41页
        3.3.1 POX4和POX5基因删除盒的构建第37-38页
        3.3.2 XZX菌株中POX4基因的敲除第38-39页
        3.3.3 菌株24中POX5基因的敲除第39-41页
    3.4 GFP在热带假丝酵母中的表达第41-44页
        3.4.1 GFP基因表达盒的构建第41-42页
        3.4.2 GFP基因表达盒的转化与鉴定第42-43页
        3.4.3 GFP基因表达效果与相对转录水平分析第43-44页
    3.5 YlALK1和YlCPR1基因在菌株28中的表达第44-50页
        3.5.1 YlALK1和YlCPR1基因表达盒的构建第44-45页
        3.5.2 菌株28中YlALK1基因的表达第45-47页
        3.5.3 菌株 52-1 中YlCPR1基因的表达第47-48页
        3.5.4 工程菌株DCA12的摇瓶发酵第48-50页
主要结论与展望第50-51页
    主要结论第50页
    展望第50-51页
致谢第51-52页
参考文献第52-56页
附录A 作者在攻读硕士学位期间发表的论文第56-57页
附录B 01菌株PCR验证的电泳结果第57-59页
附录C 02菌株PCR验证的电泳结果第59-60页
附录D wtGFP、GFPCTC和yeGFP3基因序列比对第60-61页

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