| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 热带假丝酵母遗传操作 | 第9-10页 |
| 1.2 热带假丝酵母烷烃代谢 | 第10-13页 |
| 1.2.1 ω-氧化途径 | 第10-12页 |
| 1.2.2 β-氧化途径 | 第12-13页 |
| 1.2.3 CAT与酰基辅酶A合成酶 | 第13页 |
| 1.3 热带假丝酵母代谢工程育种 | 第13-14页 |
| 1.4 立题意义与研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-28页 |
| 2.1 材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 引物 | 第17-19页 |
| 2.1.3 主要试剂和工具酶 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19页 |
| 2.1.5 仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 酵母基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.3 重组质粒Ts-CAT1-gda-URA3的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.4 重组质粒Ts-CAT1-URA3-gda的构建 | 第23页 |
| 2.2.5 重组质粒Ts-CAT2-gda324-URA3的构建 | 第23页 |
| 2.2.6 POX4和POX5基因删除盒的构建 | 第23页 |
| 2.2.7 重组质粒Ts-CAT2-gda324-URA3-P-GFP-T的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.8 YlALK1和YlCPR1基因表达盒的构建 | 第24页 |
| 2.2.9 酵母转化 | 第24-25页 |
| 2.2.10 标记基因的弹出 | 第25页 |
| 2.2.11 CAT粗酶液的制备与酶活性测定 | 第25页 |
| 2.2.12 热带假丝酵母工程菌株二元酸发酵 | 第25-26页 |
| 2.2.13 发酵液中DCA12的测定 | 第26页 |
| 2.2.14 酵母细胞的荧光显微检测 | 第26页 |
| 2.2.15 qRT-PCR对热带假丝酵母mRNA转录水平分析 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-50页 |
| 3.1 热带假丝酵母CAT基因删除突变株的构建 | 第28-34页 |
| 3.1.1 CAT基因敲除突变盒的构建 | 第28-31页 |
| 3.1.2 热带假丝酵母中CAT基因的敲除 | 第31-33页 |
| 3.1.3 gda序列对URA3基因丢失效率的影响 | 第33-34页 |
| 3.2 热带假丝酵母的CAT基因功能分析 | 第34-37页 |
| 3.2.1 CAT敲除对突变菌株生长的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.2 CAT缺失突变菌株的酶活性测定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 CAT基因敲除对菌株DCA12积累的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 热带假丝酵母POX4和POX5基因删除突变株的构建 | 第37-41页 |
| 3.3.1 POX4和POX5基因删除盒的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.2 XZX菌株中POX4基因的敲除 | 第38-39页 |
| 3.3.3 菌株24中POX5基因的敲除 | 第39-41页 |
| 3.4 GFP在热带假丝酵母中的表达 | 第41-44页 |
| 3.4.1 GFP基因表达盒的构建 | 第41-42页 |
| 3.4.2 GFP基因表达盒的转化与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4.3 GFP基因表达效果与相对转录水平分析 | 第43-44页 |
| 3.5 YlALK1和YlCPR1基因在菌株28中的表达 | 第44-50页 |
| 3.5.1 YlALK1和YlCPR1基因表达盒的构建 | 第44-45页 |
| 3.5.2 菌株28中YlALK1基因的表达 | 第45-47页 |
| 3.5.3 菌株 52-1 中YlCPR1基因的表达 | 第47-48页 |
| 3.5.4 工程菌株DCA12的摇瓶发酵 | 第48-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-51页 |
| 主要结论 | 第50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录A 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56-57页 |
| 附录B 01菌株PCR验证的电泳结果 | 第57-59页 |
| 附录C 02菌株PCR验证的电泳结果 | 第59-60页 |
| 附录D wtGFP、GFPCTC和yeGFP3基因序列比对 | 第60-61页 |
