| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 干旱胁迫对植物的影响 | 第11-13页 |
| 1.1.1 干旱胁迫对植物根系的影响 | 第11-12页 |
| 1.1.2 干旱胁迫对植物叶片的影响 | 第12页 |
| 1.1.3 干旱胁迫对植物生理过程的影响 | 第12-13页 |
| 1.2 低温冻害对植物的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 LEA蛋白研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 LEA蛋白的分布及性质 | 第14页 |
| 1.3.2 LEA蛋白的分类 | 第14-16页 |
| 1.3.3 LEA蛋白的结构与功能 | 第16-17页 |
| 1.4 柠条锦鸡儿相关研究 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第18页 |
| 1.6 技术路线 | 第18-20页 |
| 2 实验材料和方法 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株和质粒载体 | 第20页 |
| 2.2 实验药品及仪器 | 第20-24页 |
| 2.2.1 酶和相关试剂 | 第20页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.2.3 实验药品 | 第21页 |
| 2.2.4 培养基及主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2.5 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.2.6 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.3.1 植物的种植与处理方法 | 第24页 |
| 2.3.2 植物总RNA提取与反转录 | 第24-27页 |
| 2.3.3 实时定量PCR检测基因表达 | 第27页 |
| 2.3.4 目的基因全长克隆 | 第27-28页 |
| 2.3.5 植物过表达载体构建 | 第28-29页 |
| 2.3.6 农杆菌介导的拟南芥的遗传转化与纯合体筛选 | 第29页 |
| 2.3.7 萌发率和子叶绿化率检测 | 第29页 |
| 2.3.8 拟南芥幼苗主根的非生物胁迫处理及根长和鲜重测量 | 第29-30页 |
| 2.3.9 干旱胁迫表型检测 | 第30页 |
| 2.3.10 MDA含量的测定 | 第30页 |
| 2.3.11 相对电导率的测定 | 第30-31页 |
| 2.3.12 生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-48页 |
| 3.1 CkLEA4-1和CkLEA6-1基因全长的克隆 | 第32-34页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第34-37页 |
| 3.2.1 CkLEA4-1和CkLEA6-1基因的氨基酸序列分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 CkLEA4-1和CkLEA6-1蛋白亲水性分析 | 第35页 |
| 3.2.3 CkLEA4-1和CkLEA6-1蛋白的二级结构 | 第35-37页 |
| 3.2.4 CkLEA4-1和CkLEA6-1蛋白的系统进化分析 | 第37页 |
| 3.3 CkLEA4-1和CkLEA6-1基因的表达模式 | 第37-39页 |
| 3.3.1 CkLEA4-1基因的表达模式 | 第37-38页 |
| 3.3.2 CkLEA6-1基因表达量分析 | 第38-39页 |
| 3.4 CkLEA4-1和CkLEA6-1基因过表达纯合体的筛选及表达量检测 | 第39-40页 |
| 3.4.1 CkLEA4-1和CkLEA6-1基因过表达载体构建 | 第39页 |
| 3.4.2 转基因纯合体株系的筛选和鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5 过表达CkLEA4-1拟南芥对各种胁迫处理的响应 | 第40-45页 |
| 3.5.1 甘露醇胁迫下过表达CkLEA4-1拟南芥萌发率和子叶绿化率检测 | 第40-42页 |
| 3.5.2 甘露醇和NaCl对过表达CkLEA4-1拟南芥幼苗根长的影响 | 第42-43页 |
| 3.5.3 过表达CkLEA4-1拟南芥干旱胁迫表型检测 | 第43-44页 |
| 3.5.4 过表达CkLEA4-1拟南芥干旱胁迫前后丙二醛(MDA)含量测定 | 第44-45页 |
| 3.6 过表达CkLEA6-1拟南芥对低温胁迫的响应 | 第45-48页 |
| 3.6.1 过表达CkLEA6-1促进拟南芥幼苗主根伸长 | 第45页 |
| 3.6.2 低温胁迫对过表达CkLEA6-1拟南芥幼苗根长的影响 | 第45-46页 |
| 3.6.3 低温胁迫下过表达CkLEA6-1拟南芥的相对电导率检测 | 第46-47页 |
| 3.6.4 低温胁迫下过表达CkLEA6-1拟南芥MDA含量检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 CkLEA4-1和CkLEA6-1基因编码的氨基酸序列分析 | 第48页 |
| 4.2 CkLEA4-1对逆境胁迫的响应 | 第48-49页 |
| 4.2.1 CkLEA4-1表达模式分析 | 第48页 |
| 4.2.2 过表达CkLEA4-1基因可以提高拟南芥对逆境胁迫的耐受力 | 第48-49页 |
| 4.3 CkLEA6-1对低温胁迫的响应 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
