| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| ·植酸酶 | 第13页 |
| ·植酸酶的来源 | 第13-15页 |
| ·植物来源的植酸酶 | 第13-14页 |
| ·动物来源的植酸酶 | 第14-15页 |
| ·微生物来源的植酸酶 | 第15页 |
| ·植酸酶的作用机理 | 第15-16页 |
| ·植酸酶的酶学性质 | 第16-18页 |
| ·分子量 | 第16页 |
| ·最适pH值 | 第16页 |
| ·最适温度 | 第16-17页 |
| ·热稳定性 | 第17-18页 |
| ·其它性质 | 第18页 |
| ·植酸酶活性的测定方法 | 第18-19页 |
| ·硫酸亚铁-钼蓝法 | 第19页 |
| ·丙酮-磷钼酸铵法 | 第19页 |
| ·维生素C-钼蓝法 | 第19页 |
| ·钒-钼酸铵法 | 第19页 |
| ·植酸酶的应用 | 第19-21页 |
| ·植酸酶在饲料工业中的应用 | 第19-20页 |
| ·植酸酶在食品工业中的应用 | 第20-21页 |
| ·植酸酶在医药领域的应用 | 第21页 |
| ·在农业生产应用上 | 第21页 |
| ·植酸酶基因工程的研究进展 | 第21-23页 |
| ·微生物高效表达植酸酶基因 | 第22页 |
| ·植酸酶基因在植物中表达 | 第22页 |
| ·植酸酶热稳定性研究 | 第22-23页 |
| ·appA植酸酶研究进展 | 第23-26页 |
| 第二章 引言 | 第26-28页 |
| ·研究目的及意义 | 第26页 |
| ·研究的主要内容 | 第26页 |
| ·研究路线 | 第26-28页 |
| 第三章 高活性植酸酶appA菌株的筛选及基因克隆 | 第28-42页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·PCR引物 | 第28页 |
| ·药品、酶及试剂盒 | 第28-29页 |
| ·主要生化试剂和溶液 | 第29页 |
| ·植酸酶活性测定溶液 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·高活性植酸酶appA菌株的筛选 | 第30-31页 |
| ·植酸酶appA基因的克隆 | 第31-35页 |
| ·植酸酶appA基因序列分析 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-40页 |
| ·高活性植酸酶appA菌株的筛选 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌基因组的获得 | 第36页 |
| ·目的基因PCR产物 | 第36-37页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第37页 |
| ·植酸酶appA目的基因测序 | 第37-39页 |
| ·植酸酶appA基因序列分析 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第四章 植酸酶appA基因在毕赤酵母中表达 | 第42-58页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·菌种与质粒 | 第42页 |
| ·酶与试剂盒及主要试剂 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·主要试剂及常用溶液 | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-50页 |
| ·阳性克隆质粒DNA提取 | 第44-45页 |
| ·目的基因和pPIC9K空表达载体双酶切 | 第45页 |
| ·目的基因与表达载体连接 | 第45页 |
| ·转化 | 第45-46页 |
| ·碱裂解法提取重组质粒DNA | 第46页 |
| ·表达载体pPIC9K-appA线性化 | 第46-47页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态细胞制备 | 第47页 |
| ·线性化载体电转化毕赤酵母GS115 | 第47页 |
| ·阳性重组子继代培养 | 第47-48页 |
| ·PCR法筛选转化子 | 第48页 |
| ·阳性重组子酶活性鉴定 | 第48-49页 |
| ·植酸酶appA阳性重组子(His~+)毕赤酵母诱导表达 | 第49页 |
| ·诱导表达蛋白样品处理 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备、加样及电泳 | 第49-50页 |
| ·凝胶染色与脱色 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-55页 |
| ·阳性T克隆质粒提取 | 第50-51页 |
| ·EcoR Ⅰ和Not Ⅰ 双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·pPIC9k酵母表达构建 | 第52-53页 |
| ·表达重组子的转化及筛选鉴定 | 第53-54页 |
| ·基因工程菌植酸酶诱导表达 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·酵母表达系统 | 第55-56页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达 | 第56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 第五章 重组植酸酶表达蛋白纯化及酶学性质分析 | 第58-66页 |
| ·材料 | 第58-60页 |
| ·药品及试剂 | 第58页 |
| ·不同pH值缓冲液 | 第58-59页 |
| ·酶活性测定试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-61页 |
| ·重组植酸酶appA表达蛋白纯化 | 第60页 |
| ·纯化植酸酶SDS-PAGE分析 | 第60页 |
| ·植酸酶appA表达蛋白溶液定量分析 | 第60-61页 |
| ·植酸酶酶学性质研究 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-64页 |
| ·表达产物的纯化和SDS-PAGE检测 | 第61-62页 |
| ·重组植酸酶定量分析 | 第62-63页 |
| ·重组植酸酶最适pH测定 | 第63页 |
| ·重组植酸酶最适温度测定 | 第63-64页 |
| ·重组植酸酶热稳定性测定 | 第64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·重组植酸酶的纯化 | 第64-65页 |
| ·重组植酸酶的性质 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第六章 总结及下一步研究进展 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 在校期间发表的论文 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |