| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 第一章 人Notch1基因在OSCC中的突变及表达分析 | 第16-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第17-23页 |
| 1.1.1 主要实验材料 | 第17页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第17-20页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第20-23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 1.2.1 TCGA数据库中Notch1基因表达数据的获取和分析 | 第23-24页 |
| 1.2.2 UCSC数据库中病人预后生存分析数据的获取和分析 | 第24页 |
| 1.2.3 5例OSCC肿瘤组织RNA及逆转录cDNA的制备 | 第24-26页 |
| 1.2.4 OSCC病理切片样本的免疫组化 | 第26-27页 |
| 1.2.5 细胞培养 | 第27-28页 |
| 1.2.6 细胞总RNA的提取和逆转录cDNA的制备 | 第28页 |
| 1.2.7 qRT-PCR检测Notch1在OSCC组织及细胞中的表达 | 第28-29页 |
| 1.2.8 细胞总蛋白的制备 | 第29-30页 |
| 1.2.9 Western blot实验 | 第30页 |
| 1.2.10 统计学分析 | 第30-31页 |
| 1.3 实验结果 | 第31-35页 |
| 1.3.1 TCGA数据库显示Notch1在HNSCC中发生高频突变 | 第31页 |
| 1.3.2 USCS数据库显示Notch1在部分OSCC病例中表达较高 | 第31-32页 |
| 1.3.3 USCS数据库Kaplan Meier曲线显示Notch1表达较高的病人预后较好 | 第32-33页 |
| 1.3.4 qRT-PCR检测OSCC样本中Notch1 mRNA水平表达 | 第33-34页 |
| 1.3.5 免疫组化检测OSCC肿瘤样本中Notch1的表达 | 第34-35页 |
| 1.3.6 qRT-PCR和Western blot检测OSCC细胞株中Notch1的表达 | 第35页 |
| 1.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 番荔枝内酯对OSCC细胞增殖和凋亡的影响 | 第37-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 2.1.1 主要实验材料 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 2.2.1 MTT检测加ACGs后OSCC细胞增殖抑制 | 第41-42页 |
| 2.2.2 流式细胞技术检测GC细胞凋亡 | 第42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-45页 |
| 2.3.1 ACGs抑制OSCC细胞的增殖 | 第42-43页 |
| 2.3.2 ACGs诱导OSCC细胞发生凋亡 | 第43-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 番荔枝内酯通过Notch1信号通路抑制SCC15增殖 | 第46-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第49-51页 |
| 3.1.1 主要实验材料 | 第49页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第49-51页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 Western blot检测番荔枝内酯作用后Notch1及其下游靶基因的表达 | 第51页 |
| 3.2.2 N1ICD/pCMV-Tag4载体的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.3 N1ICD/pCMV-Tag4真核重组质粒的提取 | 第52页 |
| 3.2.4 N1ICD/pCMV-Tag4真核重组质粒转染SCC15 | 第52-53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-59页 |
| 3.3.1 Western blot检测番荔枝内酯作用后Notch1及其下游靶基因的表达 | 第53页 |
| 3.3.2 N1ICD/pCMV-Tag4重组质粒的构建及鉴定 | 第53-55页 |
| 3.3.3 qRT-PCR和Western blot检测N1ICD在SCC15细胞中的过表达 | 第55-56页 |
| 3.3.4 过表达N1ICD上调Notch1信号通路后,ACGs对SCC15细胞增殖的抑制作用 | 第56-57页 |
| 3.3.5 通过γ分泌酶抑制剂(DAPT)下调Notch1信号通路后,ACGs对SCC15细胞增殖的抑制作用 | 第57-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-60页 |
| 总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-74页 |
| 攻读硕士期间成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
