| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-18页 |
| 第一部分: 片仔癀对肝癌细胞生长的影响及机制研究 | 第18-31页 |
| 1、实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 药物和细胞株 | 第18页 |
| 1.2 试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2、实验方法 | 第20-26页 |
| 2.1 片仔癀干预肝癌细胞生长的影响 | 第20-23页 |
| 2.1.1 药物的配制 | 第20页 |
| 2.1.2 细胞培养及计数 | 第20-21页 |
| 2.1.3 倒置显微镜观察片仔癀干预对肝癌细胞生长的影响 | 第21页 |
| 2.1.4 MTT实验检测片仔癀干预对肝癌细胞活力的影响 | 第21-22页 |
| 2.1.5 集落形成实验检测片仔癀干预对肝癌细胞存活能力的影响 | 第22页 |
| 2.1.6 流式细胞仪检测片仔癀干预对肝癌细胞周期的影响 | 第22页 |
| 2.1.7 Hoechst染色观察片仔癀干预对肝癌细胞凋亡的影响 | 第22-23页 |
| 2.2 片仔癀干预对肝癌细胞凋亡、增殖和干性相关基因表达的影响 | 第23-25页 |
| 2.2.1 Western-blot检测片仔癀干预对肝癌细胞中凋亡增殖调控因子Bax、Bcl-2、CyclinD1、CDK4表达的影响 | 第23-25页 |
| 2.2.2 Western-blot检测片仔癀干预对肝癌干细胞特性相关因子OCT4和SOX2表达的影响 | 第25页 |
| 2.3 统计学处理 | 第25-26页 |
| 3、实验结果 | 第26-31页 |
| 3.1 片仔癀干预对肝癌细胞生长的影响 | 第26-27页 |
| 3.2 片仔癀对肝癌细胞株HepG2和BEL-7402的存活能力影响 | 第27页 |
| 3.3 片仔癀对肝癌细胞株HepG2和BEL-7402细胞周期的影响 | 第27-28页 |
| 3.4 片仔癀对肝癌细胞株HepG2和BEL-7402细胞凋亡的影响 | 第28-29页 |
| 3.5 片仔癀对肝癌细胞株HepG2和BEL-7402中Bax、Bcl-2、CyclinD1和CDK4蛋白表达的影响 | 第29-30页 |
| 3.6 片仔癀对肝癌干细胞标志物OCT4和SOX2蛋白表达的影响 | 第30-31页 |
| 第二部分: 肝癌干细胞差异表达miRNA的筛选及片仔癀干预作用 | 第31-55页 |
| 1、实验材料 | 第31-34页 |
| 1.1 药物和细胞株 | 第31页 |
| 1.2 试剂 | 第31-33页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2、实验方法 | 第34-44页 |
| 2.1 肝癌干细胞的富集及差异表达miRNA筛选 | 第34-40页 |
| 2.1.1 细胞培养及低粘附培养系统富集肝癌干细胞 | 第34页 |
| 2.1.2 RT-PCR检测克隆球和亲本细胞OCT4的表达差异 | 第34-37页 |
| 2.1.3 流式细胞仪检测CD133和CD90阳性细胞比例差异 | 第37页 |
| 2.1.4 miRNA芯片检测克隆球和亲本细胞miRNA差异表达 | 第37-38页 |
| 2.1.5 Q-PCR检测HepG2克隆球和亲本细胞miR-483-5p和miR-582-5p的差异表达 | 第38-40页 |
| 2.2 片仔癀干预对HepG2克隆球细胞生长和miR-483-5p的表达的影响 | 第40-43页 |
| 2.2.1 台盼蓝染色和细胞计数检测片仔癀干预对HepG2克隆球细胞生长的影响 | 第40页 |
| 2.2.2 高内涵观察片仔癀对HepG2克隆球细胞成球能力的影响 | 第40页 |
| 2.2.3 流式细胞仪检测片仔癀对HepG2克隆球细胞周期的影响 | 第40页 |
| 2.2.4 Hoechst染色检测片仔癀对HepG2克隆球细胞凋亡的影响 | 第40-41页 |
| 2.2.5 构建皮下移植瘤模型评价片仔癀干预对HepG2克隆球细胞体内致瘤率的影响 | 第41页 |
| 2.2.6 Western-blot检测片仔癀干预对HepG2克隆球细胞Bax、Bcl-2、CyclinD1和CDK4、OCT4、SOX2、CDKN1A的影响 | 第41页 |
| 2.2.7 Q-PCR检测片仔癀干预对HepG2克隆球细胞miR-483-5p表达的影响 | 第41-42页 |
| 2.2.8 Q-PCR检测片仔癀干预对HepG2克隆球细胞CDKN1A表达的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 统计分析 | 第43-44页 |
| 3、实验结果 | 第44-55页 |
| 3.1 肝癌干细胞富集及其差异表达miRNA筛选 | 第44-48页 |
| 3.1.1 肝癌干细胞富集体系的建立 | 第44页 |
| 3.1.2 克隆球和亲本细胞OCT4的表达差异 | 第44-45页 |
| 3.1.3 克隆球和亲本细胞CD133和CD90阳性细胞比例差异 | 第45-46页 |
| 3.1.4 HepG2克隆球和亲本细胞miRNA差异表达 | 第46-47页 |
| 3.1.5 克隆球和亲本细胞miR-483-5p和miR-582-5p差异表达验证 | 第47-48页 |
| 3.2 片仔癀干预对肝癌干细胞生长的影响和对miR-483-5p表达的调控作用 | 第48-55页 |
| 3.2.1 片仔癀干预对HepG2克隆球细胞活力的影响 | 第48页 |
| 3.2.2 片仔癀干预对HepG2克隆球细胞的克隆球能力的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.3 片仔癀干预对肝癌克隆球细胞周期的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.4 片仔癀干预对HepG2克隆球细胞凋亡的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.5 片仔癀干预对肝癌干细胞体内致瘤率的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.6 片仔癀干预对肝癌细胞Bax、Bcl-2、CyclinD1和CDK4的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.7 片仔癀干预对HepG2克隆球细胞SOX2和OCT4表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.8 片仔癀对肝癌干细胞miR-483-5p及其靶基因CDKN1A表达的影响 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 文献综述 片仔療的抗肿瘤作用机制研究进展 | 第66-73页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74-75页 |
