摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-23页 |
·几丁质的概述 | 第13-14页 |
·几丁质代谢与植物保护 | 第14-16页 |
·几丁质的代谢 | 第14-15页 |
·几丁质的合成 | 第14-15页 |
·几丁质的降解 | 第15页 |
·与几丁质有关的植物保护研究 | 第15-16页 |
·昆虫几丁质合酶的研究 | 第16-18页 |
·几丁质合酶的结构 | 第16-18页 |
·几丁质合酶的功能研究 | 第18页 |
·昆虫几丁质脱乙酰基酶的研究 | 第18-19页 |
·几丁质脱乙酰基酶的结构 | 第18-19页 |
·几丁质脱乙酰基酶的功能 | 第19页 |
·RNAi在昆虫研究及害虫防治中的应用 | 第19-21页 |
·RNAi机制 | 第19-20页 |
·昆虫RNAi的导入方法 | 第20-21页 |
·利用RNAi技术控制害虫-新型杀虫方法 | 第21页 |
·研究的目的及意义 | 第21-23页 |
第二章 几丁质合酶和几丁质脱乙酰基酶基因的克隆 | 第23-37页 |
·材料与仪器 | 第23页 |
·实验材料 | 第23页 |
·试剂与仪器 | 第23页 |
·试验方法 | 第23-27页 |
·PCR引物的设计 | 第23-25页 |
·总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第25-26页 |
·RT-PCR扩增 | 第26页 |
·PCR产物回收、纯化与T载体的连接 | 第26页 |
·转化及蓝白斑筛选 | 第26页 |
·质粒的提取和酶切验证 | 第26页 |
·序列的拼接与分析 | 第26-27页 |
·几丁质合酶基因1可变外显子的扩增 | 第27页 |
·结果与分析 | 第27-35页 |
·棉铃虫几丁质合酶基因cDNA的序列分析 | 第27-32页 |
·棉铃虫几丁质脱乙酰基酶2基因cDNA的序列分析 | 第32-35页 |
·讨论 | 第35-37页 |
·棉铃虫几丁质合酶基因克隆分析 | 第35页 |
·棉铃虫几丁质脱乙酰基酶基因克隆分析 | 第35-37页 |
第三章 棉铃虫几丁质合酶和几丁质脱乙酰基酶基因的时空表达特征分析 | 第37-47页 |
·材料与仪器 | 第37页 |
·实验材料 | 第37页 |
·试剂与仪器 | 第37页 |
·不同组织部位Ha CHS和HaCDA2 基因的表达 | 第37-39页 |
·RT-qPCR(real-time quantitative RCR)引物的设计 | 第37-38页 |
·棉铃虫不同组织部位的解剖及冻存 | 第38页 |
·总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第38页 |
·RT-qPCR分析不同组织部位HaCHS和HaCDA2 基因的表达 | 第38-39页 |
·统计学分析 | 第39页 |
·不同发育时期Ha CHS和HaCDA2 基因的表达 | 第39-40页 |
·棉铃虫不同发育时期组织材料的准备 | 第39页 |
·总RNA提取及第一链cDNA合成 | 第39页 |
·RT-qPCR分析不同发育时期HaCHS和HaCDA2 基因的表达 | 第39-40页 |
·统计学分析 | 第40页 |
·结果与分析 | 第40-44页 |
·棉铃虫不同组织和发育时期总RNA的提取 | 第40页 |
·棉铃虫不同组织和发育时期的几丁质合酶基因表达 | 第40-43页 |
·棉铃虫不同组织和发育时期的几丁质脱乙酰酶2基因表达 | 第43-44页 |
·讨论 | 第44-47页 |
·棉铃虫几丁质合酶基因表达分析 | 第44-45页 |
·棉铃虫几丁质脱乙酰酶基因表达分析 | 第45-47页 |
第四章 棉铃虫几丁质合酶和几丁质脱乙酰基酶的Feeding-based RNAi分析 | 第47-56页 |
·材料与仪器 | 第47页 |
·实验材料 | 第47页 |
·试剂与仪器 | 第47页 |
·试验方法 | 第47-51页 |
·PCR引物的设计 | 第47-48页 |
·双链RNA表达载体构建和验证 | 第48-50页 |
·昆虫试验 | 第50页 |
·HaCHS的昆虫试验 | 第50页 |
·HaCDA的昆虫试验 | 第50页 |
·RT-qPCR检测基因沉默效率 | 第50页 |
·叶片试验 | 第50-51页 |
·结果与分析 | 第51-54页 |
·dsRNA的表达验证 | 第51页 |
·喂食表达dsRNA的细菌液后目标基因的表达量 | 第51-53页 |
·喂食不同dsRNA表达菌液对幼虫形态的影响 | 第53页 |
·幼虫喂食不同dsRNA表达菌液对棉叶的影响 | 第53-54页 |
·讨论 | 第54-56页 |
结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
攻读学位期间取得的科研成果 | 第66页 |