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棉铃虫和HaCHS和CDA基因的克隆、表达及Feeding RNAi分析

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第一章 文献综述第13-23页
   ·几丁质的概述第13-14页
   ·几丁质代谢与植物保护第14-16页
     ·几丁质的代谢第14-15页
       ·几丁质的合成第14-15页
       ·几丁质的降解第15页
     ·与几丁质有关的植物保护研究第15-16页
   ·昆虫几丁质合酶的研究第16-18页
     ·几丁质合酶的结构第16-18页
     ·几丁质合酶的功能研究第18页
   ·昆虫几丁质脱乙酰基酶的研究第18-19页
     ·几丁质脱乙酰基酶的结构第18-19页
     ·几丁质脱乙酰基酶的功能第19页
   ·RNAi在昆虫研究及害虫防治中的应用第19-21页
     ·RNAi机制第19-20页
     ·昆虫RNAi的导入方法第20-21页
     ·利用RNAi技术控制害虫-新型杀虫方法第21页
   ·研究的目的及意义第21-23页
第二章 几丁质合酶和几丁质脱乙酰基酶基因的克隆第23-37页
   ·材料与仪器第23页
     ·实验材料第23页
     ·试剂与仪器第23页
   ·试验方法第23-27页
     ·PCR引物的设计第23-25页
     ·总RNA提取及第一链cDNA合成第25-26页
     ·RT-PCR扩增第26页
     ·PCR产物回收、纯化与T载体的连接第26页
     ·转化及蓝白斑筛选第26页
     ·质粒的提取和酶切验证第26页
     ·序列的拼接与分析第26-27页
     ·几丁质合酶基因1可变外显子的扩增第27页
   ·结果与分析第27-35页
     ·棉铃虫几丁质合酶基因cDNA的序列分析第27-32页
     ·棉铃虫几丁质脱乙酰基酶2基因cDNA的序列分析第32-35页
   ·讨论第35-37页
     ·棉铃虫几丁质合酶基因克隆分析第35页
     ·棉铃虫几丁质脱乙酰基酶基因克隆分析第35-37页
第三章  棉铃虫几丁质合酶和几丁质脱乙酰基酶基因的时空表达特征分析第37-47页
   ·材料与仪器第37页
     ·实验材料第37页
     ·试剂与仪器第37页
   ·不同组织部位Ha CHS和HaCDA2 基因的表达第37-39页
     ·RT-qPCR(real-time quantitative RCR)引物的设计第37-38页
     ·棉铃虫不同组织部位的解剖及冻存第38页
     ·总RNA提取及第一链cDNA合成第38页
     ·RT-qPCR分析不同组织部位HaCHS和HaCDA2 基因的表达第38-39页
     ·统计学分析第39页
   ·不同发育时期Ha CHS和HaCDA2 基因的表达第39-40页
     ·棉铃虫不同发育时期组织材料的准备第39页
     ·总RNA提取及第一链cDNA合成第39页
     ·RT-qPCR分析不同发育时期HaCHS和HaCDA2 基因的表达第39-40页
     ·统计学分析第40页
   ·结果与分析第40-44页
     ·棉铃虫不同组织和发育时期总RNA的提取第40页
     ·棉铃虫不同组织和发育时期的几丁质合酶基因表达第40-43页
     ·棉铃虫不同组织和发育时期的几丁质脱乙酰酶2基因表达第43-44页
   ·讨论第44-47页
     ·棉铃虫几丁质合酶基因表达分析第44-45页
     ·棉铃虫几丁质脱乙酰酶基因表达分析第45-47页
第四章 棉铃虫几丁质合酶和几丁质脱乙酰基酶的Feeding-based RNAi分析第47-56页
   ·材料与仪器第47页
     ·实验材料第47页
     ·试剂与仪器第47页
   ·试验方法第47-51页
     ·PCR引物的设计第47-48页
     ·双链RNA表达载体构建和验证第48-50页
     ·昆虫试验第50页
       ·HaCHS的昆虫试验第50页
       ·HaCDA的昆虫试验第50页
     ·RT-qPCR检测基因沉默效率第50页
     ·叶片试验第50-51页
   ·结果与分析第51-54页
     ·dsRNA的表达验证第51页
     ·喂食表达dsRNA的细菌液后目标基因的表达量第51-53页
     ·喂食不同dsRNA表达菌液对幼虫形态的影响第53页
     ·幼虫喂食不同dsRNA表达菌液对棉叶的影响第53-54页
   ·讨论第54-56页
结论第56-57页
参考文献第57-65页
致谢第65-66页
攻读学位期间取得的科研成果第66页

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