日本对虾MCM7克隆及其调控细胞吞噬作用的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 引言 | 第8-14页 |
| 1 日本对虾MCM7基因全长序列的克隆 | 第14-30页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·日本对虾 | 第14页 |
| ·试剂与溶液 | 第14页 |
| ·仪器与设备 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-23页 |
| ·样品制备 | 第15页 |
| ·RNA提取 | 第15页 |
| ·快速扩增cDNA末端(RACE) | 第15-16页 |
| ·3’RACE | 第16-18页 |
| ·5’RACE | 第18-19页 |
| ·序列拼接 | 第19-21页 |
| ·克隆与测序 | 第21-22页 |
| ·测序结果分析 | 第22-23页 |
| ·结果分析 | 第23-29页 |
| ·3’序列 | 第23-24页 |
| ·5’序列 | 第24-25页 |
| ·全长序列拼接与分析 | 第25-29页 |
| ·讨论 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 2 日本对虾MCM7基因的表达与抑制 | 第30-43页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·日本对虾 | 第30页 |
| ·WSSV粗提取 | 第30页 |
| ·试剂与溶液 | 第30页 |
| ·仪器与设备 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·实验材料处理 | 第31页 |
| ·RNA提取与cDNA合成 | 第31-32页 |
| ·实时荧光定量检测 | 第32-33页 |
| ·结果分析 | 第33页 |
| ·siRNA干扰设计 | 第33-35页 |
| ·体内siRNA干扰试验 | 第35-36页 |
| ·体外siRNA干扰试验 | 第36-37页 |
| ·结果分析 | 第37-41页 |
| ·MCM7组织表达差异性与病原诱导表达变化分析 | 第37-38页 |
| ·siRNA体内试验干扰MCM7表达 | 第38-39页 |
| ·siRNA体外试验干扰MCM7表达 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 3 MCM7基因在日本对虾免疫系统中的作用 | 第43-58页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·日本对虾血细胞培养 | 第43页 |
| ·试剂与溶液 | 第43页 |
| ·仪器与设备 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·siRNA敲低处理 | 第43页 |
| ·实时荧光定量检测各通路基因变化 | 第43-44页 |
| ·WSSV提取与纯化 | 第44-45页 |
| ·细胞培养观察试验 | 第45页 |
| ·病毒拷贝数试验 | 第45-46页 |
| ·死亡率(mortality)试验 | 第46-47页 |
| ·吞噬试验 | 第47-48页 |
| ·结果分析 | 第48-56页 |
| ·细胞培养观察结果 | 第48-50页 |
| ·MCM7对其他主要免疫通路与免疫因子的影响 | 第50-52页 |
| ·MCM7对病毒入侵的影响 | 第52-54页 |
| ·MCM7对吞噬作用的影响 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
