| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 1 实验部分 | 第13-24页 |
| ·试剂 | 第13-15页 |
| ·仪器 | 第15-16页 |
| ·LC/MS/MS和HPLC条件 | 第16-17页 |
| ·LC/MS/MS条件 | 第16-17页 |
| ·HPLC条件 | 第17页 |
| ·细胞的培养 | 第17页 |
| ·样品的处理 | 第17-20页 |
| ·细胞破裂物的制备 | 第17-18页 |
| ·DOX,DOXol和DAU贮备液配制 | 第18页 |
| ·标曲和质控样品的制备 | 第18-19页 |
| ·提取方法的优化 | 第19页 |
| ·细胞样品的预处理 | 第19-20页 |
| ·方法学的验证 | 第20页 |
| ·采集DOX细胞药代动力学“量—时”变化曲线 | 第20页 |
| ·LC/MS/MS和传统的HPLC法的比较 | 第20页 |
| ·免疫磁性法分离线粒体和酸性亚细胞 | 第20-21页 |
| ·蛋白免疫印迹分析 | 第21-22页 |
| ·纯化的亚细胞组分样品的前处理和LC/MS/MS测定分析 | 第22页 |
| ·构建稳定过表达AKR1C3的MCF-7细胞株 | 第22-23页 |
| ·慢病毒表达载体的构建与鉴定 | 第22页 |
| ·293T细胞转染 | 第22-23页 |
| ·筛选稳定过表达AKR1C3的MCF-7细胞株 | 第23页 |
| ·MCF-7/WT和MCF-7/AKR1C3细胞DOX代谢水平的测定 | 第23-24页 |
| 2 结果与讨论 | 第24-49页 |
| ·色质联用条件的优化 | 第24-27页 |
| ·提取方法的建立 | 第27-28页 |
| ·方法学验证 | 第28-34页 |
| ·亚细胞区域内的DOX和DOXol水平 | 第34-35页 |
| ·DOX量-时变化曲线 | 第35-37页 |
| ·方法比较 | 第37-39页 |
| ·免疫磁性分离条件的优化 | 第39-42页 |
| ·纯化的亚细胞组分内DOX和DOXol的测定 | 第42-45页 |
| ·构建稳定过表达AKR1C3的MCF-7细胞株 | 第45-48页 |
| ·重组质粒的PCR及测序鉴定 | 第45-46页 |
| ·慢病毒的包装及滴度测定 | 第46-47页 |
| ·筛选建立稳定过表达AKR1C3的MCF-7细胞株 | 第47页 |
| ·稳定株AKR1C3表达水平检测 | 第47-48页 |
| ·MCF-7/AKR1C3细胞DOX代谢水平的测定 | 第48-49页 |
| 3 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 综述 | 第57-73页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
