| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 缩写词表 | 第17-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-58页 |
| ·琥珀酸的理化性质 | 第21-22页 |
| ·琥珀酸的市场需求 | 第22-24页 |
| ·琥珀酸的应用 | 第24-27页 |
| ·N-甲基吡咯烷酮 | 第25页 |
| ·1,4-丁二醇 | 第25-26页 |
| ·γ-丁内酯 | 第26页 |
| ·己二酸 | 第26页 |
| ·四氢呋喃 | 第26页 |
| ·线性脂肪族酯 | 第26-27页 |
| ·琥珀酸盐 | 第27页 |
| ·琥珀酸的生产技术 | 第27-30页 |
| ·化学合成法 | 第27-28页 |
| ·生物转化法 | 第28-29页 |
| ·微生物发酵法 | 第29-30页 |
| ·代谢工程策略 | 第30-31页 |
| ·琥珀酸产生途径 | 第31-39页 |
| ·好氧琥珀酸产生途径及分析 | 第32-34页 |
| ·厌氧琥珀酸产生途径及分析 | 第34-39页 |
| ·大肠杆菌产琥珀酸的研究进展 | 第39-54页 |
| ·好氧产琥珀酸大肠杆菌的工程策略 | 第39页 |
| ·厌氧产琥珀酸大肠杆菌的工程策略 | 第39-54页 |
| ·厌氧产琥珀酸大肠杆菌的构建 | 第40-45页 |
| ·大肠杆菌琥珀酸发酵中酶的过量表达 | 第45-50页 |
| ·计算机辅助的代谢工程设计与分析 | 第50-51页 |
| ·发酵过程中细胞生理状态的调控策略 | 第51-52页 |
| ·碳源对大肠杆菌工程菌株厌氧琥珀酸发酵的影响 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌工程菌株产琥珀酸发酵条件控制策略 | 第53-54页 |
| ·研究基础及存在问题 | 第54-55页 |
| ·本论文的研究意义与研究内容 | 第55-58页 |
| ·研究意义 | 第55-56页 |
| ·课题来源 | 第56页 |
| ·研究内容 | 第56-58页 |
| 第二章 好氧-厌氧产琥珀酸大肠杆菌的构建及全阶段发酵琥珀酸 | 第58-120页 |
| ·实验材料 | 第59-72页 |
| ·质粒 | 第59-60页 |
| ·菌株 | 第60-61页 |
| ·寡核苷酸序列 | 第61-66页 |
| ·培养基和主要溶液 | 第66-69页 |
| ·培养基 | 第66-67页 |
| ·主要溶液 | 第67-69页 |
| ·分子生物学常用工具酶 | 第69页 |
| ·常用试剂盒 | 第69-70页 |
| ·常用生化试剂 | 第70页 |
| ·仪器和设备 | 第70-72页 |
| ·实验方法 | 第72-83页 |
| ·菌种保藏 | 第72页 |
| ·PCR扩增 | 第72页 |
| ·Gibson Assembly体外组装构建重组质粒 | 第72-75页 |
| ·CaCl_2法感受态细胞的制备 | 第75页 |
| ·热激转化CaCl_2法制备的感受态细胞 | 第75-76页 |
| ·一步法敲除和插入 | 第76-77页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第76页 |
| ·电转化 | 第76-77页 |
| ·阳性克隆的筛选和重组质粒的去除 | 第77页 |
| ·抗性基因的去除 | 第77页 |
| ·一步法提取质粒 | 第77-78页 |
| ·质粒和基因组的提取 | 第78页 |
| ·荧光定量PCR检测基因的相对转录水平 | 第78-81页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第78-79页 |
| ·反转录获得cDNA | 第79-80页 |
| ·荧光定量PCR | 第80-81页 |
| ·数据分析 | 第81页 |
| ·发酵条件 | 第81-82页 |
| ·检测方法 | 第82-83页 |
| ·发酵液中葡萄糖浓度的测定 | 第82页 |
| ·细菌生长情况检测 | 第82-83页 |
| ·发酵产物和副产物的检测 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-119页 |
| ·工程菌株QZ1111和QMJ03好氧生产琥珀酸性能比较 | 第83-89页 |
| ·拓展工程菌株QMJ03的厌氧琥珀酸生产能力 | 第89-92页 |
| ·代谢流再分配目标的选择 | 第92-94页 |
| ·pckA上游定点突变模块的构建 | 第94-96页 |
| ·SfcA组成型表达载体的构建 | 第96-99页 |
| ·增加QMJ09中PEP和Pyruvate的羧化流量 | 第99-104页 |
| ·Glf_(Zm)组成型表达载体及基因组整合模块的构建 | 第104-110页 |
| ·提高工程菌株转运葡萄糖的能力 | 第110-117页 |
| ·发酵罐好氧-微好氧-厌氧全阶段分批补料发酵生产琥珀酸 | 第117-119页 |
| ·本章小结 | 第119-120页 |
| 第三章 组成型表达TCA循环还原支路关键酶对工程菌株厌氧琥珀酸发酵的影响 | 第120-138页 |
| ·实验材料 | 第121-124页 |
| ·菌株和质粒 | 第121-122页 |
| ·寡核苷酸序列 | 第122-124页 |
| ·实验方法 | 第124-125页 |
| ·质粒的装配 | 第124页 |
| ·发酵条件 | 第124页 |
| ·检测方法 | 第124-125页 |
| ·结果与讨论 | 第125-137页 |
| ·CO_2对工程菌株YL106/pSCsfcA厌氧琥珀酸发酵的影响 | 第125-127页 |
| ·质粒pACpckA的装配 | 第127-131页 |
| ·质粒pACmdh的装配 | 第131-132页 |
| ·质粒pACfumB的装配 | 第132-133页 |
| ·质粒pACfrdABCD的装配 | 第133-135页 |
| ·组成型表达TCA循环还原支路关键酶对工程菌株厌氧琥珀酸发酵的影响 | 第135-137页 |
| ·本章小结 | 第137-138页 |
| 第四章 调控好氧电子传递链对工程菌株厌氧琥珀酸发酵的影响 | 第138-162页 |
| ·实验材料 | 第143-145页 |
| ·菌株 | 第143-144页 |
| ·寡核苷酸序列 | 第144-145页 |
| ·实验方法 | 第145页 |
| ·基因敲除 | 第145页 |
| ·发酵条件 | 第145页 |
| ·检测方法 | 第145页 |
| ·结果与讨论 | 第145-160页 |
| ·出发菌株的选择 | 第145-146页 |
| ·ndh和wrbA的缺失对工程菌株YL104厌氧琥珀酸发酵的影响 | 第146-150页 |
| ·转厌氧时间点对YL104NW全阶段发酵的影响 | 第150-152页 |
| ·延长厌氧发酵时间对YL104NW全阶段发酵的影响 | 第152-155页 |
| ·cyoB基因的敲除对YL104NW全阶段发酵的影响 | 第155-157页 |
| ·组成型表达琥珀酸发酵途径中NADH利用的酶对YL104NW全阶段发酵的影响 | 第157-160页 |
| ·本章小结 | 第160-162页 |
| 创新性成果与展望 | 第162-164页 |
| 创新性成果 | 第162页 |
| 展望 | 第162-164页 |
| 参考文献 | 第164-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第174-176页 |
| 外文写作 | 第176-185页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第185页 |
