| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·柠檬酸的结构与性质 | 第8-9页 |
| ·柠檬酸的物理性质 | 第8页 |
| ·柠檬酸的化学性质 | 第8-9页 |
| ·柠檬酸的生理性质 | 第9页 |
| ·柠檬酸的应用 | 第9-10页 |
| ·柠檬酸在食品行业中的应用 | 第9页 |
| ·柠檬酸在化工、制药、纺织业中的应用 | 第9-10页 |
| ·柠檬酸在环保方面的应用 | 第10页 |
| ·柠檬酸在禽畜业中的应用 | 第10页 |
| ·柠檬酸在其他行业中的应用 | 第10页 |
| ·柠檬酸生产的菌种选择 | 第10页 |
| ·A.niger发酵生产柠檬酸 | 第10-11页 |
| ·A.niger生物合成柠檬酸的途径 | 第10-11页 |
| ·A.niger生成柠檬酸的条件 | 第11页 |
| ·A.niger发酵代谢柠檬酸过程中草酰乙酸的产生 | 第11页 |
| ·丝状真菌转化 | 第11-15页 |
| ·可用于转化的丝状真菌种类 | 第11-12页 |
| ·用于丝状真菌转化的方法 | 第12-14页 |
| ·丝状真菌转化的选择标记 | 第14-15页 |
| ·丝状真菌转化所用到的载体 | 第15页 |
| ·丝状真菌转化的特点 | 第15页 |
| ·基因破坏和置换 | 第15-17页 |
| ·有针对的基因破坏 | 第15-16页 |
| ·随机基因破坏 | 第16-17页 |
| ·论文的立题背景及研究内容 | 第17-18页 |
| ·立题背景 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| ·实验材料 | 第18-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-20页 |
| ·培养基、试剂和抗生素 | 第20-22页 |
| ·仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·A.niger基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·目的片段扩增 | 第23-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·质粒的小量提取 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的构建 | 第26页 |
| ·大肠杆菌转化实验 | 第26-27页 |
| ·目的基因敲除及验证 | 第27-28页 |
| ·农杆菌电转化 | 第28页 |
| ·A.niger的农杆菌介导转化 | 第28-30页 |
| ·A.niger转化子的验证 | 第30-31页 |
| ·残糖、柠檬酸含量的测定 | 第31-32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-52页 |
| ·A.niger基因组的提取 | 第32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-42页 |
| ·p 44-me基因敲除质粒的构建 | 第33-37页 |
| ·p 44-mpyc基因敲除质粒的构建 | 第37-39页 |
| ·p 44-oat基因敲除质粒的构建 | 第39-42页 |
| ·目的基因敲除 | 第42-47页 |
| ·NAD~+-果酸酶基因的敲除 | 第42-44页 |
| ·线粒体丙酮酸羧化酶基因的敲除 | 第44-46页 |
| ·草酰乙酸转运蛋白基因的敲除 | 第46-47页 |
| ·野生株与突变株的形态比较 | 第47-48页 |
| ·生长曲线的测定 | 第48-49页 |
| ·残糖、柠檬酸含量的测定 | 第49-52页 |
| ·高效液相色谱测定残糖量 | 第49-50页 |
| ·柠檬酸产量的测定 | 第50-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 5 展望 | 第53-54页 |
| 6 参考文献 | 第54-62页 |
| 7 攻读硕士研究生学位期间发表论文情况 | 第62-63页 |
| 8 致谢 | 第63页 |