| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| ·常规转基因动物的制备方法 | 第13-16页 |
| ·DNA 显微注射法 | 第13-14页 |
| ·逆转录病毒载体法 | 第14页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第14页 |
| ·精子载体法 | 第14-15页 |
| ·体细胞核移植法 | 第15页 |
| ·RNAi | 第15页 |
| ·基因打靶法 | 第15-16页 |
| ·精子载体法介导基因转移的研究进展 | 第16-18页 |
| ·共孵育法 | 第16页 |
| ·电击法 | 第16页 |
| ·脂质体法 | 第16-17页 |
| ·睾丸内注射法 | 第17页 |
| ·磁性纳米基因载体转染 | 第17-18页 |
| ·转基因动物技术的应用 | 第18-20页 |
| ·在基础理论方面的应用 | 第18页 |
| ·改良动物品种和生产性能 | 第18页 |
| ·建立医学动物模型 | 第18-19页 |
| ·异种器官移植 | 第19页 |
| ·作为动物生物反应器 | 第19-20页 |
| ·转基因存在的问题与展望 | 第20页 |
| ·CuZnSOD 基因的研究进展 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第21页 |
| 2 试验材料 | 第21-24页 |
| ·试验动物和样品采集 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要数据库及生物软件 | 第23页 |
| ·常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第23页 |
| ·细菌转化、阳性克隆筛选所用试剂 | 第23页 |
| ·蛋白分析用试剂 | 第23-24页 |
| 3 试验方法 | 第24-39页 |
| ·CuZnSOD 基因启动子克隆鉴定及分析 | 第24-27页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·猪基因组提取 | 第24-25页 |
| ·CuZnSOD 基因启动子的克隆 | 第25页 |
| ·生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·不同长度 CuZnSOD 基因启动子重组载体的构建 | 第26页 |
| ·细胞培养及转染 | 第26-27页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第27页 |
| ·数据统计分析 | 第27页 |
| ·CuZnSOD 基因真核表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·CuZnSOD 基因的克隆 | 第27页 |
| ·目的片段的回收、纯化 | 第27-28页 |
| ·目的基因与真核表达载体的双酶切 | 第28页 |
| ·目的基因与真核表达载体连接 | 第28页 |
| ·重组质粒的转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第29-31页 |
| ·重组真核表达载体在小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）中的表达 | 第31-33页 |
| ·NIH/3T3 细胞的培养 | 第31页 |
| ·脂质体法转染 NIH/3T3 细胞 | 第31页 |
| ·转基因细胞系 RT-PCR 的初步鉴定 | 第31-33页 |
| ·CuZnSOD 转基因肉兔模型的制备 | 第33-39页 |
| ·无内毒素质粒的大量提取 | 第33页 |
| ·重组真核表达载体的线性化处理 | 第33-34页 |
| ·真核表达载体的睾丸内注射 | 第34-35页 |
| ·仔代个体出生及相关处理 | 第35页 |
| ·仔兔的活体荧光检测 | 第35页 |
| ·仔兔的 PCR 初步检测 | 第35-36页 |
| ·western blot | 第36-37页 |
| ·转基因兔的屠宰与肉质测定 | 第37-38页 |
| ·转基因兔肉质抗氧化性测定 | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-50页 |
| ·猪 CuZnSOD 基因启动子的克隆鉴定与分析 | 第39-42页 |
| ·猪 CuZnSOD 基因启动子的克隆 | 第39页 |
| ·猪 CuZnSOD 基因 5′端序列的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| ·不同长度启动子片段的克隆 | 第40页 |
| ·荧光素酶表达载体的构建及酶切鉴定 | 第40页 |
| ·表达载体的双萤光素酶活性检测 | 第40-41页 |
| ·核心启动子的确立 | 第41-42页 |
| ·CuZnSOD 基因真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·CuZnSOD 基因的 PCR 扩增结果 | 第42页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组载体的测序鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒 pIRES2-AcGFP1-CuZnSOD 转染 NIH/3T3 细胞后表达结果 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR | 第44页 |
| ·CuZnSOD 转基因兔模型的制备 | 第44-50页 |
| ·转基因兔的荧光蛋白表达检测 | 第44-45页 |
| ·转基因兔的 PCR 检测结果 | 第45-46页 |
| ·F1 代蛋白水平的检测 | 第46页 |
| ·F1 代、F2 代兔屠宰性能测定 | 第46-47页 |
| ·F1 代、F2 代兔肉品质测定 | 第47-48页 |
| ·F1 代抗氧化性测定 | 第48-49页 |
| ·F2 代抗氧化性测定 | 第49-50页 |
| 5 讨论 | 第50-54页 |
| ·猪 CuZnSOD 基因启动子活性分析 | 第50-51页 |
| ·制约精子载体法介导外源基因转移效率的因素 | 第51-52页 |
| ·外源 DNA 的含量及性质 | 第51页 |
| ·供体的状态及注射的方法 | 第51页 |
| ·脂质体包埋对转基因影响 | 第51-52页 |
| ·外源基因进入组织后的命运 | 第52页 |
| ·转基因动物的检测 | 第52-53页 |
| ·转基因对肉兔的影响 | 第53-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第61页 |
