| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| ·HEPCIDIN研究进展 | 第10-13页 |
| ·Hepcidin的分子生物学特征 | 第10-11页 |
| ·Hepcidin的组织分布 | 第11页 |
| ·Hepcidin与机体铁稳态 | 第11-12页 |
| ·Hepcidin与炎症和感染 | 第12页 |
| ·Hepcidin与贫血和缺氧 | 第12-13页 |
| ·Hepcidin应用前景和展望 | 第13页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第13-17页 |
| ·表达宿主和载体 | 第14页 |
| ·外源基因的转化与整合 | 第14-15页 |
| ·外源基因的表达 | 第15页 |
| ·毕赤酵母表达系统高表达策略 | 第15-16页 |
| ·应用前景 | 第16-17页 |
| ·研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 天然HEPCIDIN基因在毕赤酵母中的表达 | 第18-34页 |
| ·试验材料 | 第18-20页 |
| ·试验仪器 | 第18页 |
| ·质粒与菌株 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·所用培养基及溶液的配制 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-28页 |
| ·引物序列 | 第20-21页 |
| ·猪Hepcidin基因真核表达载体的构建 | 第21-24页 |
| ·重组酵母工程菌的构建 | 第24-25页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·筛选高拷贝转化子 | 第26页 |
| ·Hepcidin基因在毕赤酵母中的表达 | 第26页 |
| ·重组酵母表达上清的SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白生物活性的检测 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·Hepcidin真核表达载体重组克隆的抗生素筛选 | 第28页 |
| ·Hepcidin重组克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒的测序结果 | 第29-30页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第31页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE及生物活性检测 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 HEPCIDIN基因改造及在毕赤酵母中的表达 | 第34-49页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·试验仪器 | 第34页 |
| ·质粒与菌株 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·所用培养基及溶液的配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·Hepcidin基因密码子优化 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·重组质粒pGAPZαA-S-Hepcidin的构建 | 第36-39页 |
| ·重组酵母工程菌的构建 | 第39页 |
| ·重组酵母的PCR鉴定 | 第39页 |
| ·筛选高拷贝转化子 | 第39页 |
| ·S-Hepcidin基因在毕赤酵母中的表达 | 第39页 |
| ·重组酵母表达上清的Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的生物活性检测 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-47页 |
| ·猪S-Hepcidin基因的获得 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒pGAPZαA-S-Hepcidin的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组酵母工程菌的获得 | 第42-43页 |
| ·重组酵母表达上清的Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的抑菌活性 | 第44-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·Hepcidin基因密码子的优化 | 第47页 |
| ·Hepcidin的真核表达 | 第47-48页 |
| ·Hepcidin的生物活性分析 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
