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玉米与纹枯病菌互作蛋白的系统筛选

摘要第1-8页
Abstract第8-11页
縮略词表第11-13页
1 前言第13-23页
   ·玉米纹枯病的研究进展第13-17页
     ·玉米纹枯病病原菌第13-14页
     ·玉米纹枯病病原菌致病机制第14-15页
     ·玉米纹枯病的抗性机制及抗性种质资源的筛选第15-17页
   ·植物与病原菌的互作第17-20页
     ·植物对病原菌免疫机制简介第17页
     ·植物病原菌蛋白质效应子第17-20页
   ·酵母双杂交系统及其在研究病原物与寄主互作中的作用第20-22页
     ·酵母双杂交系统第20-21页
     ·酵母双杂交技术筛选寄主病原物互作中的应用第21-22页
   ·本研究的目的和意义第22-23页
2 材料及方法第23-36页
   ·材料第23-24页
     ·植物及病原物材料第23页
     ·菌株和质粒第23页
     ·酶、试剂盒及其他试剂第23页
     ·引物合成及序列测定第23-24页
     ·仪器第24页
   ·方法第24-36页
     ·纹枯病菌的培养、接种及取材第24-25页
     ·“诱饵”载体pGBKT7的线性化第25页
     ·玉米和纹枯病菌cDNA的合成第25-29页
     ·酵母的转化及“诱饵”文库自激活的去除第29-32页
     ·酵母双杂交筛选互作蛋白质第32-33页
     ·互作蛋白质的鉴定及分析第33-34页
     ·纹枯菌培养液SOD活性的检测第34-36页
3 结果与分析第36-58页
   ·“诱饵”载体pGBKT7的线性化第36-37页
   ·玉米和纹枯病菌cDNA的合成第37-39页
     ·玉米和纹枯菌总RNA的提取和检测第37-38页
     ·双链cDNA的合成和检测(LD-PCR)第38-39页
   ·酵母的转化及“诱饵”文库自激活的去除第39-43页
     ·ds cDNA转化酵母菌株Y187和Y2HGold第39-41页
     ·纹枯菌文库中自激活单克隆的去除第41页
     ·文库重组比的鉴定第41-42页
     ·文库保存及滴度检测第42-43页
   ·酵母双杂交筛选互作蛋白质第43-45页
     ·酵母双杂交阳性克隆的筛选第43-44页
     ·杂交效率检测第44页
     ·双杂交阳性克隆凝胶电泳检测第44-45页
   ·阳性克隆的cDNA插入片段序列分析和功能预测第45-58页
     ·cDNA插入片段序列分析第45-48页
     ·cDNA插入片段功能及信号肽预测分析第48-57页
     ·纹枯菌超氧化物歧化酶分泌性的检测第57-58页
4 讨论第58-66页
   ·对于本方法的思考第58-59页
   ·纹枯菌与玉米互作机制的假设第59-65页
   ·展望第65-66页
参考文献第66-76页
附录1 酵母破菌缓冲液和沉淀缓冲液的配制第76-77页
附录2 纹枯病菌Mating序列原始信息第77-81页
致谢第81页

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