| 第一章 结直肠癌中相关分子：Occludin, PHF14 以及 KIF4A 的改变与功能研究 | 第1-33页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 主要缩略语 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 一、 结直肠癌 | 第12页 |
| 二、 紧密连接蛋白 | 第12-14页 |
| 三、 Occludin | 第14页 |
| 四、 PHF14 | 第14-15页 |
| 五、 KIF4A | 第15页 |
| 材料与方法 | 第15-20页 |
| 一、 材料与试剂 | 第15页 |
| 二、 临床、标本资料 | 第15-16页 |
| 三、 结直肠癌标本转录水平的检测 | 第16-17页 |
| （一） 结直肠癌组织标本 RNA 的提取 | 第16页 |
| （二） 标本总 RNA 反转录成 cDNA | 第16页 |
| （三） RealTime PCR 检测 | 第16-17页 |
| 四、 结直肠癌标本翻译水平的检测 | 第17-18页 |
| （一） SDSPAGE 凝胶电泳 | 第17-18页 |
| （二） 免疫印记（Western blot ） | 第18页 |
| 五、 双向电泳 | 第18-19页 |
| （一） 等电聚焦 | 第18页 |
| （二） 胶条平衡 | 第18页 |
| （三） 凝胶电泳 | 第18-19页 |
| 六、 结直肠癌细胞培养和转染 | 第19页 |
| （一） SW620 和 CaCo2 细胞株的培养 | 第19页 |
| （二） 脂质体法转染 | 第19页 |
| 七、 免疫荧光共定位 | 第19-20页 |
| 八、 统计方法 | 第20页 |
| 结果 | 第20-30页 |
| 一、 Occludin 在结直肠癌中的变化 | 第20-26页 |
| （一） 结直肠癌标本中 Occludin 普遍低表达 | 第20页 |
| （二） Occludin 与 APC 在转录存在明显的正相关性 | 第20-21页 |
| （三） Occludin 在结直肠癌中有着特殊的缺失 | 第21页 |
| （四） Occludin 对结直肠癌细胞株的影响需要进一步验证 | 第21-26页 |
| 二、 PHF14 在结直肠癌标本中的表达变化 | 第26-27页 |
| 三、 KIF4A 在结直肠癌标本中普遍高表达 | 第27-30页 |
| 讨论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二章 一种同时提取微量组织中 DNA、RNA 和总蛋白方法的改进 | 第33-50页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| Abstract | 第34-36页 |
| 主要缩略语 | 第36-37页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 材料与方法 | 第38-42页 |
| 一、 主要试剂、耗材 | 第38页 |
| 二、 改良 TRIzol 法提取小鼠肝脏组织总 RNA、DNA 和蛋白 | 第38-39页 |
| （一） 总 RNA 的提取 | 第38页 |
| （二） 总 DNA 的提取 | 第38页 |
| （三） 总蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 三、 传统 TRIzol 法提取小鼠肝脏组织总 RNA | 第39-40页 |
| 四、 QIAamp Kit 法提取小鼠肝脏组织总 DNA | 第40页 |
| 五、 RIPA Buffer 裂解法提取小鼠肝脏组织总蛋白 | 第40页 |
| 六、 总 RNA 的检测及比较 | 第40-41页 |
| （一） RNA 纯度检测 | 第40页 |
| （二） RNA 完整性检测 | 第40-41页 |
| 七、 基因组 DNA 的检测 | 第41页 |
| （一） 基因组 DNA 纯度检测 | 第41页 |
| （二） 基因组 DNA 的酶切鉴定 | 第41页 |
| 八、 总蛋白的检测 | 第41-42页 |
| （一） 蛋白质浓度测定 | 第41页 |
| （二） 总蛋白完整性检测: | 第41-42页 |
| 九、 统计方法 | 第42页 |
| 结果 | 第42-47页 |
| 一、 总 RNA 的检测 | 第42-43页 |
| 二、 基因组 DNA 的检测 | 第43-44页 |
| 三、 总蛋白量的检测 | 第44-47页 |
| 讨论 | 第47-48页 |
| 结论与思考 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| 综述：结直肠癌与紧密连接蛋白 | 第50-59页 |
| 一、 结直肠癌 | 第50页 |
| 二、 紧密连接蛋白 | 第50-54页 |
| （一） Occludin | 第52-53页 |
| （二） Claudins | 第53页 |
| （三） ZOs | 第53-54页 |
| 三、 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
| 附录 1 标本留取知情同意书 | 第59-60页 |
| 附录 2：主要试剂、培养基 | 第60-62页 |
| 附录 3：主要商业试剂 | 第62-63页 |
| 附录 4：主要抗体 | 第63页 |
| 附录 5：主要质粒 | 第63-64页 |
| 已完成或发表论文 | 第64页 |
| 获奖情况 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
