| 英文缩写词表 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 文献综述 | 第13-39页 |
| 一、 BMP研究进展 | 第13-32页 |
| 二、 成骨分化特异性转录因子Cbfal | 第32-39页 |
| 前言 | 第39-41页 |
| 实验部分 | 第41-81页 |
| 第一部分 rhBMP2成骨分化作用的研究 | 第41-54页 |
| 实验材料 | 第41-42页 |
| 实验方法 | 第42-44页 |
| 一、 rhBMP的表达制备 | 第42页 |
| 二、 rhBMP诱骨活性实验 | 第42-43页 |
| 三、 细胞培养 | 第43页 |
| 四、 ALP活性测定 | 第43页 |
| 五、 OC含量的测定 | 第43页 |
| 六、 细胞蛋白质含量测定 | 第43-44页 |
| 七、 MTT法测定细胞活性 | 第44页 |
| 实验结果 | 第44-50页 |
| 一、 rhBMP纯化结果 | 第44-45页 |
| 二、 rhBMP2诱骨组织学观察 | 第45页 |
| 三、 ALP测定结果 | 第45-47页 |
| 四、 OC含量测定 | 第47-48页 |
| 五、 细胞内蛋白质含量测定 | 第48页 |
| 六、 rhBMP2对细胞增殖的影响 | 第48-50页 |
| 讨 论 | 第50-54页 |
| 一、 关于BMP诱骨活性及其应用前景 | 第50-52页 |
| 二、 关于BMP的活性检测 | 第52-54页 |
| 第二部分 rhBMP定量测活方法的建立 | 第54-81页 |
| 实验材料 | 第54-56页 |
| 实验方法 | 第56-60页 |
| 一、 RNA提取 | 第56页 |
| 二、 反转录 | 第56页 |
| 三、 细胞基因组DNA提取 | 第56页 |
| 四、 PCR | 第56-57页 |
| 五、 质粒提取、细菌转化及电泳等 | 第57-58页 |
| 六、 细胞转染 | 第58页 |
| 七、 抗性细胞的筛选 | 第58页 |
| 八、 单克隆细胞的挑选 | 第58页 |
| 九、 单克隆细胞稳定性检验 | 第58页 |
| 十、 Luciferase活性测定 | 第58页 |
| 十一、 核酸杂交 | 第58-60页 |
| 十二、 rhBMP-2m诱骨活性比较 | 第60页 |
| 实验结果 | 第60-77页 |
| 一、 RT-PCR或PCR | 第60-61页 |
| 二、 序列分析 | 第61-62页 |
| 三、 载体构建 | 第62-66页 |
| 四、 载体Luciferase基础活性的测定 | 第66页 |
| 五、 不同细胞克隆Luciferase活性比较 | 第66-68页 |
| 六、 单克隆细胞生长特性 | 第68页 |
| 七、 稳定转染单克隆细胞的鉴定 | 第68-70页 |
| 八、 不同单克隆细胞对rhBMP-2反应性 | 第70-71页 |
| 九、 不同种rhBMP活性比较 | 第71页 |
| 十、 不同方法复性的rhBMP-2活性比较 | 第71页 |
| 十一、 rhBMP-2与rhBMP-2对照品比较 | 第71-73页 |
| 十二、 不同细胞因子对单克隆细胞Luciferase活性影响 | 第73-74页 |
| 十三、 不同方法复性rhBMP-2诱骨的组织学观察 | 第74-77页 |
| 讨 论 | 第77-81页 |
| 一、 关于Luciferase报告基因系统 | 第77-78页 |
| 二、 关于基因稳定转染与外源基因整合稳定性问题 | 第78-79页 |
| 三、 关于稳定转染单克隆细胞用于rhBMP测活的问题 | 第79-81页 |
| 小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
