| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 C90RF100在肝癌发生发展中的作用及机制的研制 | 第12-52页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一章 C9orf100在肝癌样本及细胞株中的表达差异 | 第16-29页 |
| ·材料与方法 | 第16-22页 |
| ·临床组织样本的获取 | 第16页 |
| ·细胞培养 | 第16-17页 |
| ·细胞RNA抽提及逆转录 | 第17-18页 |
| ·半定量及定量PCR | 第18-20页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第20-22页 |
| ·统计学分析 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-26页 |
| ·C9orf100基因在肝癌组织中的表达分析 | 第22-24页 |
| ·C9orf100基因在肝癌细胞株和不同人体正常组织中的表达分析 | 第24-25页 |
| ·C9orf100蛋白在肝癌细胞中的亚细胞定位 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第二章 C9orf100可以促进肝癌细胞的增殖和转移 | 第29-46页 |
| ·材料与方法 | 第29-38页 |
| ·C9orf100的siRNA的设计和合成 | 第29-30页 |
| ·siRNA转染及干扰效率的评价 | 第30-31页 |
| ·C9orf100真核表达载体构建 | 第31-34页 |
| ·pcDNA3.1(-)B-FLAG-hrGFP-C9orf100质粒的转染 | 第34-35页 |
| ·细胞蛋白提取和蛋白免疫印迹技术(Western Blot) | 第35-36页 |
| ·CCK8检测细胞的生长 | 第36-37页 |
| ·细胞克隆形成实验 | 第37页 |
| ·细胞迁移能力测定 | 第37-38页 |
| ·统计分析 | 第38页 |
| ·结果 | 第38-44页 |
| ·内源性C9orf100基因表达下调抑制肝癌细胞增殖 | 第38-39页 |
| ·过表达C9orf100基因促进肝癌细胞生长 | 第39-40页 |
| ·过表达C9orf100基因促进肝癌细胞克隆形成 | 第40-41页 |
| ·过表达C9orf100基因促进肝癌细胞迁移 | 第41-43页 |
| ·C9orf100基因的表达下调能够抑制肝癌细胞迁移能力 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 第三章 C9orf100促进肝癌细胞增殖机制的初步探讨 | 第46-51页 |
| ·材料与方法 | 第46-47页 |
| ·流式细胞仪分析细胞周期 | 第46-47页 |
| ·流式细胞仪分析细胞凋亡 | 第47页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·C9orf100基因的表达下调能够诱导MHCC-97H细胞的G_2/M期阻滞和S期细胞减少 | 第47-48页 |
| ·C9orf100基因的表达下调能够诱导MHCC-97H细胞凋亡 | 第48-49页 |
| ·蛋白C9orf100正向调控蛋白AKT的磷酸化 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第51页 |
| 总结 | 第51-52页 |
| 第二部分 STC2在肝癌形成中发挥致癌作用及机制的研究 | 第52-74页 |
| 前言 | 第52-53页 |
| 第一章 STC2在肝癌样本及细胞株中的表达规律 | 第53-60页 |
| ·材料与方法 | 第53-55页 |
| ·临床组织样本的获取 | 第53页 |
| ·细胞培养 | 第53-54页 |
| ·细胞RNA抽提及逆转录 | 第54页 |
| ·半定量及定量PCR | 第54页 |
| ·组织和细胞蛋白的提取 | 第54-55页 |
| ·细胞蛋白提取和蛋白免疫印迹技术(Western Blot) | 第55页 |
| ·统计学分析 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·STC2在肝癌组织中的表达差异 | 第55-58页 |
| ·STC2在肝癌细胞株中的表达水平 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第二章 STC2可以促进肝癌细胞的生长和转移 | 第60-70页 |
| ·材料与方法 | 第60-64页 |
| ·STC2的siRNA的设计和合成 | 第60页 |
| ·siRNA转染及干扰效率的评价 | 第60页 |
| ·STC2真核表达载体构建 | 第60-61页 |
| ·pSUPER-shRNA质粒的构建 | 第61-63页 |
| ·质粒的转染 | 第63-64页 |
| ·细胞蛋白提取和蛋白免疫印迹技术(Western Blot) | 第64页 |
| ·CCK8检测细胞的生长 | 第64页 |
| ·细胞迁移能力测定 | 第64页 |
| ·统计分析 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-68页 |
| ·STC2基因表达下调抑制肝癌细胞增殖 | 第64-65页 |
| ·稳定干扰STC2基因表达抑制肝癌细胞克隆形成 | 第65-66页 |
| ·过表达C9orf100基因促进肝癌细胞生长和克隆形成 | 第66-67页 |
| ·STC2基因表达的变化对肝癌细胞迁移能力的影响 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·结论 | 第69-70页 |
| 第三章 STC2在肝癌发生发展中发挥致癌作用机制的初步探讨 | 第70-73页 |
| ·材料与方法 | 第70页 |
| ·流式细胞仪分析细胞周期 | 第70页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-72页 |
| ·基因沉默STC2表达引起MHCC-97H和MHCC-97L细胞的G_0/G_1期阻滞和S期减少 | 第70-71页 |
| ·蛋白STC2的表达量变化对细胞周期相关调控蛋白P53、CyclinD1的表达水平和ERK1/2磷酸化水平的影响 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·结论 | 第73页 |
| 总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 综述 | 第79-87页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 硕士研究生期间所发表文章 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
