| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 简写说明 | 第7-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-18页 |
| ·睾丸的形态、结构和功能 | 第10-11页 |
| ·睾丸的形态与结构 | 第10页 |
| ·睾丸的功能 | 第10-11页 |
| ·精子发生及调节 | 第11-13页 |
| ·精子发生过程 | 第11-12页 |
| ·精子发生的调节 | 第12-13页 |
| ·支持细胞 | 第13-14页 |
| ·支持细胞的形态结构 | 第14页 |
| ·支持细胞的作用 | 第14页 |
| ·支持细胞的培养 | 第14页 |
| ·GDNF及其作用 | 第14-16页 |
| ·GDNF的发现 | 第14页 |
| ·GDNF及受体 | 第14-15页 |
| ·GDNF在睾丸中的表达及功能 | 第15-16页 |
| ·研究目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 小鼠睾丸未成熟支持细胞的分离、纯化和培养 | 第18-26页 |
| 一 实验材料 | 第18-21页 |
| 1 实验动物 | 第18页 |
| 2 主要仪器 | 第18页 |
| 3 主要试剂 | 第18页 |
| 4 主要溶液及配方 | 第18-21页 |
| 二 实验方法 | 第21-22页 |
| 1 支持细胞的分离和纯化 | 第21页 |
| 2 免疫细胞化学分析 | 第21-22页 |
| 三 结果 | 第22-26页 |
| 1 睾丸细胞的初培养 | 第22页 |
| 2 支持细胞的传代培养 | 第22页 |
| 3 培养的小鼠支持细胞的形态 | 第22-23页 |
| 4 培养物中的支持细胞纯度 | 第23-25页 |
| 5 结论与讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 小鼠GDNF基因的克隆与表达 | 第26-42页 |
| 一 引言 | 第26页 |
| 二 实验仪器和主要试剂 | 第26-31页 |
| 1 主要试剂和材料 | 第26页 |
| 2 主要仪器 | 第26页 |
| 3 主要溶液及配方 | 第26-31页 |
| 三 实验方法 | 第31-37页 |
| 1 TM4的复苏、培养、传代 | 第31页 |
| 2 培养的支持细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| 3 特异性引物设计及合成 | 第31-32页 |
| 4 甲醛凝胶变性电泳检测所提总RNA的完整性 | 第32页 |
| 5 cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| 6 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 7 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| 8 回收目的基因片段 | 第33页 |
| 9 目的基因连接到pMD-T vector载体 | 第33页 |
| 10 E.coli感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 11 目的基因转化感受态E.coli细胞 | 第34页 |
| 12 蓝白斑的筛选 | 第34页 |
| 13 质粒提取 | 第34页 |
| 14 阳性克隆重组子的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 15 真核表达载体pCDNA3.1-gdnf的构建及鉴定 | 第35页 |
| 16 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第35页 |
| 17 TM4细胞的转染及筛选 | 第35-36页 |
| 18 RT-PCR鉴定 | 第36页 |
| 19 免疫细胞化学分析 | 第36页 |
| 20 Western-Blot检测TM4细胞系中GDNF的表达 | 第36-37页 |
| 四 实验结果 | 第37-40页 |
| 1 小鼠睾丸未成熟支持细胞总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 2 小鼠睾丸未成熟支持细胞GDNF cDNA的扩增 | 第38页 |
| 3 重组质粒pCDNA3.1-gdnf酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 4 RT-PCR法检测到外源GDNF基因在转基因支持细胞中转录效率 | 第39页 |
| 5 细胞免疫化学法检测GDNF基因在筛选出的TM4中高水平表达 | 第39页 |
| 6 Western-blot法检测GDNF基因的表达 | 第39-40页 |
| 五 讨论和结论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 发表文章 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
