| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-19页 |
| 符号说明 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 第一部分 Tim-3在M1/M2型巨噬细胞中的表达及其对巨噬细胞极化的调节作用 | 第24-38页 |
| 1 材料 | 第24-27页 |
| ·细胞 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·DNA分子量Marker | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·PCR引物与Tim-3 SiRNA序列 | 第25-26页 |
| ·试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-33页 |
| ·小鼠腹腔淀粉诱导的巨噬细胞和居留巨噬细胞的分离 | 第27页 |
| ·小鼠骨髓巨噬细胞的分离 | 第27-28页 |
| ·Trizol法提取细胞总RNA | 第28页 |
| ·反转录 | 第28-29页 |
| ·PCR检测 | 第29-30页 |
| ·lipofectamin2000转染SiRNA | 第30页 |
| ·ELISA试剂盒检测细胞上清中IL-10/IL-12的分泌 | 第30-31页 |
| ·流式细胞术检测转染后细胞中Tim-3表达 | 第31页 |
| ·Western Blotting检测Tim-3的表达,验证siRNA抑制效果 | 第31-33页 |
| ·统计学处理 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-38页 |
| ·M2型巨噬细胞Tim-3表达水平显著高于M1型巨噬细胞 | 第33-36页 |
| ·抑制Tim-3表达有效促进M1型巨噬细胞极化 | 第36-38页 |
| 第二部分 Tim-3调节巨噬细胞极化对肝癌细胞生长的影响 | 第38-47页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| ·细胞和实验动物 | 第38页 |
| ·临床标本 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·试剂配制 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| ·血标本流式检测 | 第39页 |
| ·Ficoll法分离人外周血单个核细胞 | 第39-40页 |
| ·人和鼠肝癌标本中肝细胞和浸润淋巴细胞的分离 | 第40页 |
| ·共培养实验 | 第40-41页 |
| ·分离小鼠脾细胞 | 第41页 |
| ·共培养中Tim-3的阻断实验 | 第41-42页 |
| ·动物实验研究Tim-3介导的巨噬细胞极化在肿瘤发生中的作用 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-47页 |
| ·原发性肝癌患者外周血及肿瘤内CD14~+细胞Tim-3表达显著升高 | 第42-43页 |
| ·肝癌细胞体外共培养可促进M2型巨噬细胞极化并上调Tim-3的表达 | 第43-44页 |
| ·共培养中阻断Tim-3可显著减弱M2型巨噬细胞极化 | 第44-45页 |
| ·荷瘤小鼠体内巨噬细胞Tim-3表达显著升高,干扰Tim-3后的M2可明显抑制小鼠体内肿瘤的生长 | 第45-47页 |
| 讨论 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 发表文章 | 第55-56页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第56页 |
