| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 绝缘子研究进展:种类丰富,功能繁多,机理多样,应用广泛 | 第9-21页 |
| ·目前发现的绝缘子 | 第9-14页 |
| ·无脊椎动物绝缘子 | 第9-10页 |
| ·脊椎动物绝缘子 | 第10-11页 |
| ·绝缘子类边界元件 | 第11-13页 |
| ·绝缘子的广泛存在 | 第13-14页 |
| ·绝缘子的功能 | 第14-17页 |
| ·绝缘子的增强子阻遏功能 | 第14-15页 |
| ·绝缘子的抗基因沉默功能 | 第15-16页 |
| ·绝缘子的转录调控功能 | 第16-17页 |
| ·绝缘子功能的多样性 | 第17页 |
| ·存在的各种模型和假说 | 第17-19页 |
| ·"跟踪"模型和转录诱捕模型 | 第17-19页 |
| ·结构域边界模型和环结构域模型 | 第19页 |
| ·相关的绝缘子蛋白 | 第19页 |
| ·绝缘子的应用和前景展望 | 第19-21页 |
| ·绝缘子在转基因中的应用 | 第19-20页 |
| ·绝缘子在基因治疗中的应用 | 第20页 |
| ·绝缘子的进一步探寻和机理研究展望 | 第20-21页 |
| 第二章 Gateway克隆技术的介绍 | 第21-32页 |
| ·Gateway克隆技术的优点 | 第22-23页 |
| ·非常方便 | 第22页 |
| ·能快速可靠地获得实验结果 | 第22-23页 |
| ·可同时对大量不同序列片断进行克隆和亚克隆操作 | 第23页 |
| ·拥有完整统一且灵活多变的载体系统 | 第23页 |
| ·Gateway克隆技术原理 | 第23-27页 |
| ·Gateway克隆技术基础 | 第23-25页 |
| ·BP反应 | 第25-26页 |
| ·LR反应 | 第26-27页 |
| ·CcdB抗性筛选 | 第27页 |
| ·Gateway入门载体体系介绍 | 第27-29页 |
| ·入门载体分类 | 第27页 |
| ·如何选择合适的载体 | 第27-28页 |
| ·入门克隆的构建方法 | 第28-29页 |
| ·Gateway靶向载体体系介绍 | 第29-30页 |
| ·靶向载体分类 | 第29页 |
| ·构建表达载体方法 | 第29页 |
| ·普通载体如何转换为Gateway靶向载体 | 第29-30页 |
| ·Gateway克隆技术存在的问题探讨 | 第30-32页 |
| ·由aatB位点引入的多余氨基酸 | 第30页 |
| ·片断长度对BP或LR反应活性的影响 | 第30页 |
| ·关于attB识别位点在基因组中出现的概率 | 第30页 |
| ·关于Gateway克隆的花费 | 第30-32页 |
| 第三章 基于酶切连接体系的拟南芥若干启动子分析载体的构建及结果分析 | 第32-49页 |
| ·引言 | 第32-33页 |
| ·材料和方法 | 第33-37页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·基本分子克隆方法 | 第33页 |
| ·启动子克隆引物 | 第33-35页 |
| ·基本PCR反应及产物回收 | 第35页 |
| ·酶切连接 | 第35-36页 |
| ·转化及鉴定 | 第36页 |
| ·农杆菌转化 | 第36页 |
| ·转基因及转基因植物的筛选 | 第36-37页 |
| ·GUS染色及镜检观察 | 第37页 |
| ·结果和讨论 | 第37-49页 |
| ·启动子分析载体的构建说明 | 第37-38页 |
| ·序列分析说明 | 第38-39页 |
| ·序列分析 | 第39-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·后续实验 | 第48-49页 |
| 第四章 重组克隆体系中植物启动子分析载体的改进研究 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49-51页 |
| ·材料和方法 | 第51-58页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·若干基本的实验操作技术 | 第51页 |
| ·构建入门载体 | 第51页 |
| ·LR反应 | 第51-52页 |
| ·含果蝇绝缘子的启动子分析载体的构建 | 第52-53页 |
| ·连接入第二条绝缘子序列 | 第52页 |
| ·连接入第一条绝缘子序列 | 第52-53页 |
| ·连回pHGWFS7_AatⅡB | 第53页 |
| ·引物序列 | 第53页 |
| ·含翻译增强序列的启动子分析载体的构建 | 第53-54页 |
| ·连入翻译增强序列 | 第53-54页 |
| ·连回pWJHA的SacⅡ小片断pWJHA-SacⅡB | 第54页 |
| ·引物序列 | 第54页 |
| ·构建Sirt1启动子的若干启动子分析载体 | 第54-55页 |
| ·把Sirt1启动子连入pHGWFS7 | 第54-55页 |
| ·把sirt1启动子连入pWJHA | 第55页 |
| ·把sirt1启动子连入pWJHB | 第55页 |
| ·引物序列 | 第55页 |
| ·验证绝缘子抑制位置效应普遍性的几个载体的构建 | 第55-56页 |
| ·首先扩增得到35S全长和35Smini启动子片断 | 第55页 |
| ·构建入门载体 | 第55-56页 |
| ·构建表达载体 | 第56页 |
| ·引物序列 | 第56页 |
| ·选择标记干扰的排除和绝缘子的增强子阻遏功能的研究 | 第56-58页 |
| ·构建第二条绝缘子3’端加入报告基因的载体 | 第56-57页 |
| ·构建第二条绝缘子5’端加入报告基因的载体 | 第57页 |
| ·构建第二条绝缘子5’端和3’端都加入报告基因的载体 | 第57页 |
| ·引物序列 | 第57-58页 |
| ·结果和讨论 | 第58-63页 |
| ·绝缘子作用的研究 | 第58-60页 |
| ·出发载体pHGWFS7 | 第58页 |
| ·加入绝缘子序列,构建pWJHA | 第58页 |
| ·以Sirt1基因启动子两个分析载体的转基因材料为例分析载体改进结果 | 第58-60页 |
| ·翻译增强序列作用的研究 | 第60-61页 |
| ·加入翻译增强序列,构建pWJHB | 第60页 |
| ·以Sirt1基因启动子两个分析载体的转基因材料为例分析载体改进结果 | 第60-61页 |
| ·选择标记干扰的排除 | 第61-63页 |
| ·构建第二条绝缘子3’端加入报告基因的载体 | 第61页 |
| ·构建第二条绝缘子5’端加入报告基因的载体 | 第61-62页 |
| ·构建第二条绝缘子5’端和3’端都加入报告基因的载体 | 第62页 |
| ·实验预期 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-75页 |
| 谢师表 | 第75页 |
